dNTP/ddNTP

[*Céline*]

Bonjour!

J'ai un problème concernant la diapo:

" Méthode de Sanger (1977): 4 réactions indépendantes contenant chacune un seul ddNTP (A, T, C ou G) + 4 dNTP + 1 dNTP radiomarqué + amorce + Polymérase + fragment d’ADN à séquencer "

1) Ça révèle peut être du détails, mais ça me semble important : 4 dNTP
On en met 4 types différents de dNTP mais pas que 4... ici c'est juste un manque de précision mais du coup c'est faux.

2) 1 dNTP radiomarqué : dans la ronéo c'est le ddNTP qui est radiomarqué. Et puis par logique on arrive à la même conclusion.

Merci d'avance!

[tit' calcium]

Hello

Alors dans la méthode Sanger (qui est celle qui a donné le principe actuel mais qui est un peu ancienne ) On faisait 4 réactions séparées. Dans chaque tubes un type de ddNTP marqué (soit A soit T soit C soit G) . Pourquoi? Parce que contrairement à actuellement on arrivait pas à différencier les A, T, C et G (si j'ai bien compris on utilise maintenant des fluorochromes de couleur différentes donc plus de problème).
Dans le tube où on marque les A: on ne mettait que des ddNTP A comme ça on savait que ce qui était marqué était les A.
Et à la fin on regroupait les résultats des gels et on en concluait les suites de base en fonction du poids.

Donc dans chaque tube tu as :
1 sorte de ddNTP (marqué) + 4 sortes de dNTP + amorce + polymérise + frangment.
Mais on ne le faisait que pour des tous petits bouts.

Maintenant, on met tout ensemble car on différencie un ddNTP A d'un ddNTP G....

C'est bon pour toi?
Bisous

[*Céline*]

Tout d'abbord je te remercie pour ta réponse si rapide tit' calcium !

Après j'avais pas de problème de compréhension concernant la méthode Sanger. C'est ce qui a écrit dans la diapo qui me dérange.

Ce serait sympa qu'un tuteur passe pour voir si ce qu'il y a écrit dans la diapo est véritablement correct. Dans le cas contraire, en informer les profs.

Tu vois où je veux en venir tit' calcium ?

[tit' calcium]

Yeah I see (faut que j'arrête je ne sais pas parler anglais )
Je dirais qu'il y a bien un problème d'après la citation que tu fais. Il me semble bien que ce soit :
1 ddNTP radiomarqué

PS: désolée j'avais mal compris ton soucis

[Kardajian]

Salut !

J'ai pas bien compris où se situer le problème, vous pourriez reformuler la question plz ? ^^'
Si c'est à vause du ddNTP radiomarqué, avant dans la méthode Sanger on utilisait des ddNTP radiomarqué :

- 4 réactions indépendantes séparés pour ne permettre l'incorporation que d'un seul type de ddNTP par tube, donc 4 tubes différents
- Ajout sur un gel pour migration élécrophorétique de chacun des tubes pour avoir une lecture de la séquence en commencent par le bas du gel afin de commencer par le plus petit fragment

C'est bon pour vous ?

[*Céline*]

Encore une fois:

J'ai un problème concernant la diapo

Après j'avais pas de problème de compréhension concernant la méthode Sanger. C'est ce qui a écrit dans la diapo qui me dérange.

il me semble qu'il y a un problème dans la diapo 6. Ce que j'ai cité dans mon premier message.

[Kardajian]

Salut !


Pour ce qu'il y a marqué dans le diapo :

4 réactions indépendantes contenant chacune un seul ddNTP (A, T, C ou G) +
4 dNTP + 1 dNTP radiomarqué + amorce + Polymérase + fragment d’ADN à séquencer

- 4 dNTP : il faut lire 4 dNTP différents, on n'en met pas que 4 dans le tube ^^

- 1 dNTP radiomarqué : ce sont les ddNTP qui sont radiomarqué, il y a une petite coquille dans le diapo ^^'

C'est bon pour toi ?

[*Céline*]

Pour moi c'est bon!

Merci