ddNTP

[Hélèn83]

Bonjour!

Je n'est pas compris la méthode la méthode Sanger avec le ddNTP

en fait j'ai beau relire la partie avec le ddNTP (je ne comprend pas à quoi ça sert de stoppé la séquence) en quoi cela permet une étude de la séquence ?

[rockfort]

Coucou

Alors c'est de l'UE11, donc pas important pour le cours de Biocell, mais:
- Tu as ta séquence nucléotidique que tu souhaites séquence
- Tu mets dans ta machine des nucléotides normaux (dNTP) qui vont constituer un brin complémentaire
- Tu mets aussi des ddNTP qui vont stopper la séquence: en fait ce des dNTP modifiés, et qui sont fluorescents (chaque base va correspondre à une couleur). Dès qu'ils sont incorporés dans le brin complémentaire, la synthèse de brin complémentaire s'arrête.

http://www.snv.jussieu.fr/vie/dossiers/ ... igure4.gif

La polymérase incorporant au hasard des dNTP ou des ddNTP, si ta séquence est AATTGCG, tu vas "obtenir 7 brins complémentaires":
AATTCGC
T
TT
TTA
TTAA
TTAAG
TTAAGC
TTAAGCG

(ceux en couleur sont des ddNTP, après là j'ai pas respecté les couleurs officielles xD)

Et à la fin ta machine va te sortir ça:
TTAAGCG

Poutou séquencé

[Hélèn83]

Dac merci mais ça sert a quoi de faire CA ?! :s

[rockfort]

Une fois que tu as la séquence colorée, tu en déduis la séquence initiale (qui est complémentaire).

Et là, tu pourras regarder s'il y a une mutation par exemple !

[Hélèn83]

Dac merci !