Immunofluorescence indirecte et fixation

[♦MC♦]

Salut,
dans un item des annatut' : il est dit que l'immunofluorescence indirecte nécessite la fixation cellulaire.

1) A vrai dire, je ne me rappelle plus trop ce que ça signifie de "fixer" une cellule exactement.

2) Lorsque l'on fixe les cellules = les cellules deviennent "mortes" (= doit-on considérer que cellules fixées = cellules mortes) ?

3) Info complémentaire : l'item est compté pour vrai, et je sais que l'immunofluorescence indirecte est utilisée sur des cellules mortes et vivantes !

4) Info complémentaire bis : La question a déjà été posé les années précédentes, mais j'ai vaguement compris les réponses. Apparemment, un ex-tut avait affirmé que le prof avait changé sa version (plus de fixation)...bref, quelle est la bonne réponse ?

Merci !

[Edit : Après réflexion et relecture du cours, je me rappelle que l'on parle de fixation au tetroxyde d'osmium ou au glutaraldéhyde dans le cas de microscopie électronique, je pense que c'est pour "figer" les cellules, et qu'elles meurent sans altérer leur structure...et donc je crois bien qu'on peut justement utiliser des cellules fixées ou non en IFI, c-a-d mortes ou vivantes. Je demande juste confirmation ]

[Audre_yy]

Salut Salut
Alors histoire d'être sure jreprend quand même tes premières questions :
Alors la fixation comme tu l'a dit c'est indispensable pour la microscopie électronique ( et ça se fait bien avec ces produits au noms barbares C'est utile parce que ça permet d'étudier la cellule telle qu'elle, ça évite la solubilisation, ça conserve bien tout comme c'était ... mais ça tue la cellule

Pour l'immuno fluorescence indirecte on va pouvoir utiliser des cellules vivantes ( non fixée ) si notre protéine d'intérêt se trouve en surface
Par contre si elle est située à l'intérieur de la cellule, les anticorps ne pourront pas passer et on va être obligé de fixer la cellule ( et donc ça la tue )

Donc pour ta confirmation on peut bien utiliser des cellules mortes ou vivantes

J'espère que ça répond à ta question
Poutou poutou

PS : Désolée mes réponses ont tendance a être légèrement à ralonge

[♦MC♦]

Merci !
Par contre, lorsque l'on étudie une protéine intra-cellulaire, non située sur la mb plasmique, les techniques "de passage" des Ac ne sont pas mortelles, non ? (micro-injection / vectorisation par vésicule / électroporation) ou alors tu veux dire que : ces techniques en elles-mêmes ne sont pas mortelles, mais pour être appliquées, il faut fixer au préalable la cellule, c'est ça ?

[Audre_yy]

Re salut

Alors les techniques que tu cite ( électroporation, 'micro injection .... ) sont utilisées pour incorporer un fluorochrome à ta cellule pour la rendre fluo sans la tuer, dans le même principe que la formation d'hybrides GFP - X

Dans l'immuno fluo, on utilise des anticorps et ces techniques ne s'appliquent pas à eux, ils sont trop gros pour entrer dans la cellule.
Du coup on est obligé de fixer la cellule et de '' l'ouvrir '' pour pouvoir visualiser une protéine dedans

C'est pour ça que l'immuno fluo sur des protéines intra cellulaires c'est possible mais pas super pratique

C'est plus clair ?

Poutou poutou

[♦MC♦]

C'est bon !
Merci !