DM mort cellulaire

[anahita_fontanille]

Bonjour !
Dans le DM sur la mort cellulaire, je n'arrive pas très bien à comprendre ces deux items :
A) La technique du pic subG1 nécessite une fixation préalable des cellules (vrai)
B) La méthode du double marquage (PI + Hoechst ou Annexine V+ PI) nécessite une fixation préalable des cellules (faux)
qu'est ce que c'est la fixation préalable ? et pourquoi avec du hoechst ou du PI, on ne fixe pas préalablement ? dans quels expériences on aura une fixation préalable ?
désolé ça fait beaucoup de questions, dites moi si je n'ai pas été claire
merci beaucoup et bonne journée !

[Sandrinsuline]

Coucouuu

C'était hyper clair !!
La fixation permet en quelque sorte d’immobiliser les cellules dans un état aussi proche que leur état vivant (comme si on les figeait), pour bien les observer, les colorer… Et par la même occasion, on peut les perméabiliser !! Et préalable signifie qu’on le fait avant que l’expérience ne commence (c’est quand même mieux haha). Donc, pour mon cours, tu retiens que fixer = trouer en gros !!
Déjà, j’espère que cette partie est claire, sinon n’hésites pas à me le dire, je reformule tout ça sans aucun problème ^_^

Ensuite, et de manière générale, pour le cours sur la mort cellulaire on ne va pas chercher à fixer (donc sous-entendu perméabiliser) les cellules. Pourquoi ? Tout simplement parce que pour interpréter nos résultats, on va se baser sur les MODIFICATIONS MEMBRANAIRES de nos cellules :
Je vais te donner des petits exemples SANS PERMÉABILISATION préalable :
- Si positif pour l’annexine V = phosphatidyl-sérines sur le feuillet externe = cellules nécrotiques et/ou apoptotiques (pas les saines)
- Si positif pour l’IP = uniquement les cellules nécrotiques car ce sont les seules naturellement perméables (pas les apoptotiques, ni les saines)
Tu vois ici que si on avait perméabilisé toutes les cellules, on n'aurait jamais pu les distinguer.

Maintenant, pour la technique du pic sub-G1, dans le cours on nous mentionne qu’elle s’effectue avec l’IP. Or, on veut travailler avec des cellules apoptotiques, dont la membrane plasmique est INTÈGRE (= NON perméable). Donc on est forcément obligé de la trouer (= de la fixer) pour que l’IP colore l’ADN. Tu comprends ?

J'espère que c'est compréhensible haha et je te souhaites bon courage

[anahita_fontanille]

c'était super clair, merci beaucoup !!