Séquençage de l’ADN

[Jules DraiLarvi]

Bonjour,
Je ne comprends vraiment pas l'utilité d'utiliser les ddNTP dans dans le séquençage pour finalement obtenir des fragments de différentes tailles. Pourquoi ne pas directement regarder notre fragment le plus gros, il aura toutes les bases et il suffira de le lire, non ?

[LenADN]

Coucouuu,

On met des dNTPs et des ddNTPs et pas seulement des dNTPs car on ne peut pas lire des dNTPs. Seuls les ddNTPs sont couplé à un fluorochrome et c’est comme ça qu’on les détecte. Donc pour chacun des fragments (de taille différente), le seul nucléotide qu’on lit c’est le ddNTPs, c’est pour ça qu’il faut des fragments de différentes tailles. Par exemple :

Tu veux lire cette séquence : n1 - n2 - n3 (n = nucléotide)

Tu vas avoir plusieurs fragments :
- fragment 1 : ddNTP (bleu) —> n1 = C
- fragment 2 : dNTP - ddNTP (rouge) —> n2 = T
- fragment 3 : dNTP - dNTP - ddNTP (vert) —> n3 = A

Grâce à l’analyse des trois fragments, on sait que la séquence est : CTA

Il faut aussi comprendre que plus le fragment est petit, plus il migre vite et loin, c’est comme ça qu’on option l’ordre des nucléotides, ici par exemple, le fragment 1 sera lu en premier puis le 2, puis le 3.

J’espère que tu as compris, sinon dis-le moi !