Coucou A!ex
J'avais pas vu ce post et je crois que j'aurais préféré ne pas le voir
Il m'a embrouillé l'esprit, je n'ai pas vraiment compris ta question
Ce qu'il faut retenir pour cette année en UE11 :
1) LA BASE = la migration électrophorétique qui permet de
séparer des particules chargées électriquement en fonction de 2 choses :
leur masse moléulaire
la concentration en agarose ou gel d'acrylamide
2) Tu as plusieurs support pour faire cette séparation :
gel d'agarose
(pour séparer grosses molécules ++ ADN/ARN) gel polyacrylamide
(pour séparer molécules plus petites ++ Protéines/petits fragments d'ADN) capillaire rempli d'un autre gel que ceux précédemment cités (ce gel conduit le courant et donc aussi nos particules d'ADN chargé - et utilise la mobilité électrophorétique différentes des différentes tailles de fragment d'ADN = + c'est petit + ça migre vite) Intérêt du capillaire c'est qu'il est + rapide + sensible et surtout automatisable, un automate se charge de tout (meilleur exemple le séquenceur capillaire). En fait, ton capillaire passe dans un détecteur qui s'occupe de traiter les données. Dans les séquenceurs automatiques, le détecteur = un système laser qui s'occupe de déterminer qu'elle a été le ddNTPs intégré. Mais après tout dépend de l'info à traiter, le détecteur ne sera as le même (absorption UV, fluorimétrie, conductivité ...)
3)Tu as 3 applications, en biologie moléculaire :
Southern Blot
= les fragments d'ADN sont séparés, en fonction de leur taille, sur
un gel d’agarose par migration électrophorétique
= ils sont transférés sur une membrane
= les ADN d’intérêts sont révélés après hybridation d’une sonde complémentaire marquée
(petite vidéo pour mieux visualiser :
http://www.larousse.fr/encyclopedie/ani ... ot/1100028)
Northern Blot : pareil que le southern
= sauf qu'on utilise un
gel d'agarose dénaturant sinon l'ARN qui est simple brin à tendance à se refermer sur lui-même)
Western Blot, même principe
= sauf qu'on utilise un
gel d'acrylamide dénaturant (pour pas avoir des protéines 3D, mais linéaires)
= la différence avec les acides nucléiques toujours chargés -, c'est que la charge des protéines dépend de sa composition en acide aminés et du pH. Donc souvent on utilise du SDS qui va entouré toutes les protéines de charges -, du coup elles migreront bien vers le + durant l'électrophorèse.
= sauf qu'on utilise l'intéraction antigène-anticorps pour détecter la protéine d'intérêt alors qu'avec ADN/ARN on utilisait des sondes complémentaires radioactifs reposant sur le principe de complémentarité des bases (exemple d'application du western blot : diagnostic de plein de maladie dont le VIH)
Voilà j'espère que c'est plus claire, dès fois je sors un peu du cadre du cours, mais ça permet de mieux comprendre, enfin j'espère
Bonne journée
