Expression d'un gêne

[Avendil]

Salut !

Lorsqu'on veut étudier l'expression d'un gêne, on peut dire qu'on peut le faire avec PCR/western blot (études sur l'ARN et l'ADN) ou on s'en tient uniquement au Northern - blot ?

Merci d'avance

[MBrown]

en général ce serait surout du timelapse pour voir ou la protéine fluorerscente va ; apres je ne serais te répondre plus précisement

[Azula]

Salut

Tu n'as pas une technique référence pour étudier l'expression des gènes, ça dépend de ce que tu veux étudier et parfois tu as plein de manière différentes d'étudier cette chose.
Je sais pas par exemple si tu veux voir en fonction du milieu de culture quel gène s'exprime (levure milieu aérobie vs anaérobie), tu peux faire :
Northern-blot (révéler les ARNm d'intérêts des enzymes spécifiques de ces situations)
ou Western-blot (rechercher directement la présence de ces enzymes en fonction de la situation)

S'il faut suite à une mutation, ton gène s'exprime moins du coup tu a moins d'ARNm correspondant et donc un déficit en cette protéine.
Comment tu le vois ?
Ça fait une bande plus fine au niveau de ton northern-blot/southern-blot.

Tu peux aussi le remarquer par étude de la localisation de la protéine par fluorescence. L'intensité de la fluorescence sera moindre ou carrément absente (protéine non synthétisée = le gène ne s'exprime pas : un codon stop prématuré ?).

La fluorescence te permet aussi d'étudier la pathogénicité d'une mutation pas qu'au niveau quantitatif ( +, -, 0), mais aussi qualitatif (localisation, structure...) . Une protéine qui est sensé être dans le cytoplasme est qui se retrouve séquestrée dans la mithochondrie, tu m'étonnes qu'elle puisse pas faire son travail et que la cellule fonctionne moins bien = maladie.

Toute ces études ne viennnt qu'après transfection d'un ADN étranger dans une cellule eucaryotes = clonage d'expression
Il faut un support d'étude facile + eucaryote pour pouvoir émettre des hypothèses plus pertinentes sur nous = mammifères eucaryotes. Vous n'êtes pas sans savoir que c'est la levure

Après on pourra envisager des études de pathogénécité sur un support + proche de nous (organisme génétiquement modifié > souris...), ou même provenant directement de nous (cultures de cellules humaine sous sérum de veau foetal = apport facteurs de croissance ect). Mais c'est plus chères ect ect Donc on fait les choses dans l'ordre.

Voilà j'espère que ça répond à ta question Et sache qu'en UE 11, on te demande pas de connaitre tout les domaines d'application ect. Ce sera pour plus tard si la recherche t'intéresse
D'ailleurs elles n'en citent pas bcp en cours, mais juste de bien comprendre toutes ces méthodes d'études du génome. Et si tu les as bien compris, tu sauras face à un QCM si il est pertinent d'utiliser tel ou tel méthode, simplement en suivant la logique.

Bonne journée et si t'as d'autres points qui te posent problème n'hésites pas