Qcm 5 item C

[pimmipimbi]

Bonjour le prof a bien parlé de l Histoir de la déphosphorilation mais il ne me ssemble pas qu'ils ai parlé une préférence pour un type de coupe.
Voici ce qu'il y a dans la rodéo :
On utilise une phosphatase : enzyme qui catalyse le retrait du phosphate 5' pour créer une extrémités OH.
On peut phosphoriler le vecteur ou la insert :
Ainsi la ligase ne pourra plus refermer le vecteur tout seul et on aura majoritaires une liaison entre vecteurs et insert.
Voila merci

[Bro-06]

C'est dans le diapo

[Pelouuuts]

C'était dit ni dans la ronéo de cette année ni dans celle de l'an dernier en effet

[melilou]

ouais enfin le diapo de cette année il est sorti aujourd'hui.. c 'est dans quel diapo stp ?

[Polo]

Ca m'intéresse fortement

[rafraf06]

Le seul truc qu'on marque dans la roneo c'est qu'il faut déphosphoryler Parce qu'il peut arriver que les deux extremites' d'un vecteur se relie entre-eux par une activité' ligase ... C'est en bas de la page 5 roneo 2
Donc + 1 pour une double correction ...

[epsilon59]

+1

[A!ex]

+1

[Elliot]

+1

[Azula]

Salut vous tous !

Alors c'est moi qui est fais ce qcm et je savais en lisant la ronéo que ça poserait problème. Mais je l'ai délibérément gardé (vicieux ? non pédagogique )
Mais c'est texto la diapo, elle ne l'a peut-être pas spécifié à l'oral mais ça reste vrai ! Voilà maintenant vous le savez

En revanche, tu me fais remarquer que dans la ronéo il y a écrit qu'on peut déphosphoryler l'insert ou le vecteur. Chimiquement parlant c'est vrai, tu mets ta phosphatase en présence d'insert ou de vecteur, ça déphosphoryle.
En revanche, si on s'en tient à la logique de cette manip vous êtes d'accord que dans les faits on déphosphoryle seulement le vecteur et vous le savez maintenant quand il présente "des bout francs".
Pourquoi ?
Pour ne pas que le vecteur se referme sans insert alors que notre but c'est de faire des vecteurs avec insert pour séparer 2 pop d'ADN et les amplifier.
on comprends dès lors que déphospho l'insert, c'est pas pertinent il ne va pas " se refermer" sur lui-même^^
déphospho les 2, c'est bête car on ne peut plus former la liaison 3'-5' phosphodiester si on a pas au moins 1 phosphate en 5' ( ici il reste que le P en 5' de l'insert vu qu'on déphospho en 5' du vecteur)
Sur la diapo, c'est bien le vecteur qu'on déphospho :

Après pourquoi on fait ça qu'avec ce type de coupure
Surement que la fermeture du vecteur sans insert est très thermodynamiquement favorable quand les extrémités sont franches.
Mais je peux demander aux profs car c'est pertinent comme question et c'est intéressant à savoir

Voilà j'espère que ça vous convient

Bonne soirée

[rafraf06]

Je m'incline c'est du super boulot

[Azula]

Merci rafraf06

J'ai trouvé ça dans les fin fonds du fofo, ça peut vous intéresser ça avait posé problème en 2012 aussi. Le tuteur a eu la même conclusion que moi (c'est le tout dernier post):
viewtopic.php?f=232&t=21096

En fait peut-être qu'avec des extrémités franches, il n'y a que l'action de la ligase qui soude indifféremment vecteur seul ou vecteur avec insert. Et donc -- vecteur avec insert = nécessité de déphospho le vecteur
Alors qu'avec des extrémités cohésifs vous avez la spécificité de la complémentarité des bases qui rentre en compte entre vecteur et insert donc ++ vecteur avec insert.

[Polo]

Vous me faites rêver avec vos réponses, merci beaucoup