Questions

[LucileChpn]

Bonsoir, j’ai qques questions les voici:

1: Est-ce qu'on faire la vectorisation par vésicules avec les bactéries ou c'est uniquement avec eucaryotes ?

2: Je ne comprends pas en quoi la PCR en temps réel présente moins de risques de contaminations qu'une PCR qualitative ? (Item dans l'annatut)

3: On dit que les extrémités a bouts francs ne peuvent pas faire d'associations spontanées, pourtant ce sont elles qu'on déphosphoryle pour ne pas que le vecteur se ferme tout seul...
Ya donc un truc qui m'as échappé mais quoi ?

MERCI

[LucileChpn]

...?

[Azula]

Bonsoir, j’ai qques questions les voici:

Salut Lucile

1: Est-ce qu'on faire la vectorisation par vésicules avec les bactéries ou c'est uniquement avec eucaryotes ?

Bonne question mais saches que tu n'auras jamais de question sur ça, c'est hors programme
Mais oui c'est possible bien que ce ne soit pas citée dans le cours. Disons que c'est plus complexe et long à mettre en place faire des petites vésicules avec l'ADN recombinant dedans ect, alors que choc thermique ou élèctrique ça prends 2sec (j'exagère mais tu vois ce que je veux dire ). Le but de la transformation bactérienne dans le clonage c'est juste séparer, amplifier des populations d'ADN. Du coup, on s'en fout de brutaliser un peu la cellule par choc thermique ou électrique. On préférera alors ces méthodes là.
Mais quand on veut faire une étude d'expression après la transfection dans une cellule eucayote, on veut que la cellule se comporte comme d'habitude qu'elle exprime un nouveau variant de mutation exonique inconnue pour qu'on détermine sa pathogénicité. Est-ce que la protéine fait son boulot (si enzyme, on regarde si on retrouve les produits de la réaction qu'elle catalyse ect ect), est-ce qu'elle est bien localisée dans la cellule pas de séquestration qui l'empêche de bosser ect ect ) Du coup, on préfèrera des méthodes moins brutales comme la vectorisation avec les liposomes.

2: Je ne comprends pas en quoi la PCR en temps réel présente moins de risques de contaminations qu'une PCR qualitative ? (Item dans l'annatut)
Je sais pas d'où ça sort, le risque est le même les seules différences c'est que pour la PCR en temps réel on mesure la fluorescence après chaque cycle et non après les 35-40 cycles et que l'une est quantitative et l'autre qualitative. Pourrais-je avoir l'année et le numéro du qcm pour voir ça

3: On dit que les extrémités a bouts francs ne peuvent pas faire d'associations spontanées, pourtant ce sont elles qu'on déphosphoryle pour ne pas que le vecteur se ferme tout seul...
Ya donc un truc qui m'as échappé mais quoi ?

Qui dit associations spontanées dit sans enzyme. Hors pour que ton vecteur se referme seul sans insert donc , c'est la T4 ligase qui vient souder les 2 extrémités. Du coup, on déphosphoryle pour empêcher l'action de la ligase sur vecteur seul.
Quand t'as des extrémités cohésifs, les hybridations d'ADN complémentaire sont possibles et ceux spontanément. C'est ça qu'on appelle associations spontanées. Mais pour "souder" le tout avec ou sans insert, on besoin de la ligase aussi attention.
Tu vois ce que je veux dire ?
MERCI

De rien, désolée pour le délai, j'espère que ça répond à ta question sinon n'hésite pas

Bonne soirée