Le forum officiel du Tutorat Niçois

par **Juliette♣** » 10 Avr 2015, 11:43

Saluut !

J'ai une petite question concernant ce QCM :
A propos de la PCR en temps réel :
C. Grâce à une gamme étalon, on peut quantifier le nombre de copie d'ADN au départ à partir du cycle seuil. (compté vrai)

Dans la ronéo 3 p.4, il est dit :
On peut tracer des gammes étalon qui nous permettent de déterminer la quantité d'ADN mise au départ en fonction de la quantité d'ADN dans le milieu réactionnel, de la fluorescence et du nombre de cycles.

J'ai compté cet item faux parce que pour moi on peut quantifier l'ADN de départ à partir des trois facteurs cités ci-dessus.

:arrow:

MAIS En écrivant ce post, je crois avoir compris pourquoi cet item est juste. :victory:

En fait, on peut quantifier l'ADN de départ à partir des paramètres énumérés dans la ronéo, mais uniquement à partir du moment où on a dépassé le seuil de fluorescence détectée. Si on est en dessous, on aura beau connaître la quantité d'ADN dans le milieu réactionnel et le nombre de cycles, on ne pourra rien faire vu qu'on ne connait pas l'intensité de la fluorescence !

C'est donc pour cela que l'item est juste, c'est bien ça ?

Je ne l'avais pas compris comme ça mais je crois avoir compris finalement ^^

Merci d'avance et bonne journée ! :giggle:

par **Azula** » 12 Avr 2015, 19:26

Coucou Juliette

C'est beau de voir une question et une réponse dans le même post sur un de mes qcms :clap:

Le but de la PCR quantitative est de quantifier lol le nombre de copie d'ADN à la base dans notre échantillon (charge viral ect).
Or plus tu as de l'ADN d'intérêt à la base, moins le nombre de cycle nécessaire pour commencer à détecter de la fluorescence est grand. En somme, le Cycle seuil Ct sera +petit. Je dis ADN d'intérêt car en PCR tu n'amplifies que la région d'ADN qui t'intérressent avec des amorces spé qui encadrent seulement cette région (gène du VIH for example). Petit exemple "patatoïde"

bcp de copie d'ADN : Ct= 10 cycles
peu de copie d'ADN : Ct = 24 cycles

Donc le cycle seuil est inversement proportionnelle au nombre de copie d'ADN ou à la concentration de cette ADN à la base (= avant amplificaton PCR).
C'est là qu'intervient la gamme d'étalon = Ct en fonction du log de la concentration d'ADN ( tu vois qu'elle est décroissante, c'est l'histoire du INVERSEMENT proportionnelle OSEF hein :glasses-cool:

c'est juste pour le plaisir de voir que tout est logique).
Tu as accès directement à la concentration de l'ADN d'intérêt à l'origine.
Et dès lors tu comprends aussi pourquoi en PCR quantitative, on mesure la fluorescence après chaque cycle et non comme en la PCR classique après 35-40 cycles (plateau). Sinon comment on pourrait savoir à partir de quel cycle on capte la fluorescence :question: