Errata Ronéo 2 et Immunofluorescence indirecte

[melatonine]

Bonjour !

J'ai un problème avec la page 13 de la ronéo 2 (Immunofluorescence indirecte) je trouve qu'il y a un contre sens

Au début on dit :

"On utilise le terme "indirect" car les molécules n'ont pas de propriétés de fluorescence propres, on va devoir utiliser des anticorps qui eux vont être couplés à un fluorochrome ce qui va les rendre fluorescentes."

Un peu plus bas :

"On dit que l'immunofluorescence est directe, cad que les Ac fluorescents viennent directement se fixer à la molécule étudiée, ou indirecte cad qu'elle peut faire intervenir plusieurs anticorps"



" Page 13 encadré du bas : rajoutez « LES DEUX FLUOROCHROMES DOIVENT EMETTRE DANS DEUX COULEURS DIFFÉRENTES POUR ETRE DIFFÉRENCIÉS » " Je pense que ca ne parle pas de l'immunofluorescence indirecte, je me trompe ? (c'est pas le FRET?)


Merci d'avance pour la réponse , je sais pas si c'est très important , mais je veux vraiment bien comprendre .. Bisous

[Lamellipode]

Hey !

Cette année la Pr. Long Mira évoque deux techniques d'immunofluorescence : Directe et Indirecte.

Celle indirecte, c'est celle qu'elle détaille avec l'utilisation des anticorps primaires, puis secondaires, dont les secondaires qui sont couplés à des fluorochromes et reconnaissent les Ac primaires, non fluorescent mais qui eux reconnaissent la molécule à étudier.
Cette technique est utilisée lorsqu'il n'exite pas dans le commerce des Ac fluorescents reconnaissant la molécule à étudier directement.

La directe, elle ne la détaille pas, mais se serait l'Ac qui est couplé à un fluorochrome qui reconnait directement la molécule, sans utiliser le complexe de l'immunofluorescence indirect.

Le rajout de l'encadré du bas : les deux fluorochromes doivent émettrent dans deux couleurs différentes c'est bien pour l'immunofluorescence indirecte, lorsque l'on veut mettre en évidence 2 PROTEINES différentes !

Nb: Pour le FRET = Pour démontrer que deux molécules interagissent, elles doivent être à moins de 10nm, et leur spectre d'absorption et d'émission se chevaucher : la première molécule absorbe, et la longueur d'onde de son émission doit correspondre à l'absorption de l'autre qui libèrera une longueur d'onde d'émission encore différente

J'espère que ça va
Bonne continuation

[melatonine]

Ah oui lorsque l'on veut observer 2 proteines différentes, là je comprends mieux ahah

Merci pour ta réponse !! Du coup pour la première phrase, je pense qu'il faut remplacer le mot "indirect" par "immunofluorescence" !

Bonne journée !