Ok c'est parti
On veut vérifier si les gènes transcrits sont décondensés contrairement aux gènes non transcrits
On sait que plus l'ADN est décondensé, plus il est sensible à la DNase1 et donc plus il sera clivé en petits morceauxOn prend 2 cellules dont on sait qu'une seule synthétise la globine
On récupère l'ADN de ces 2 cellules.
Grâce à une
enzyme de restriction, on coupe autour du gène codant pour la globine (on coupe un fragment de
4.6 kb) et on récupère ce fragment d'ADN contenant le gène globine pour les 2 cellules.
On met ensuite ces gènes en présence de
DNase1 et on les fait migrer sur un
gel d'électrophorèse.
plus les gènes sont sensibles à la DNase1, plus ils vont être clivés en des petits morceaux, plus ils migreront et moins on les verra sur l'électrophorèse.
Pour la cellule qui exprimait la globine :On met des
concentrations croissantes de DNase1 et on voit sur l'électrophorèse qu'au fur et à mesure qu'on augmente la concentration on ne peut plus du tout voir l'ADN sur le gel d'électrophorèse
le gène a été clivé en des bouts beaucoup trop petits donc le gène était sous forme d'ADN décondensé car très sensible à la DNase1
A une concentration de 1.5 microgrammes par millilitre, on ne voit plus d'ADN sur l'électrophorèse
Pour la cellule qui n'exprimait pas la globine :On met directement la
concentration maximale de DNase1 (1.5 microgrammes par millilitre) et on observe toujours une tâche correspondant à
4.6 kb!
le gène n'a presque pas été clivé, il est
resistant à la DNase1 donc il est sous forme
condensée les gènes transcrits sont sous forme décondensés alors que les gènes non transcrits sont sous forme condensée2ème expérience :On prend une cellule qui exprime la globine, on utilise une enzyme de restriction qui va nous permettre de récupérer un fragment d'ADN de 4.5 kb contenant le gène de la globine.
On expose ce fragment d'ADN à la DNase1 en augmentant les concentrations
très doucement sans monter dans des concentrations élevées.
On observe très vite la disparition d'un fragment de cet ADN, notre fragment initial a donc été coupé en 2.
Ce fragment a été coupé à des
concentrations très faible de DNase1 il s'agit d'une région qui est dite
hypersensible à la DNase1, ces régions hypersensibles sont caractéristiques des
séquences régulatrices des gènes
J'espère que j'ai été clair
par Polo » 16 Oct 2014, 10:19 
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