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par **Chloette** » 27 Oct 2014, 10:05

Hé coucou !!

Alors j'ai une petite question toute simple, lorsqu'on utilise la fluorescence induite (Colorant qui deviennent fluorescent lorsqu'ils se fixe à la molécule) on parle bien de colorants différents de ceux qu'on utilise de préférence sur cellule morte c'est bien ça ? (après fixation qui induit la mort)

En gros pour notre fluorescence induite avec Hoetch et Dapi (Aucun besoin de perméabilisation de la membrane donc ne tue pas la cellule) mais les intercalants vont eux tuer la cellule (car besoin de perméabilisation) ...
Tandis que les colorants (il me semble que le formaldéhyde en est un va lui être utilisé mais sur des cellules déjà morte ?)

Juste un petit récap :
Gluthéraldéhyde : agent de fixation uniquement
Tétroxyde d'osmium : Agent de fixation ET de contraste
Formaldéhyde : ?

Je crois que je suis entrain de m'auto perdre .... :silly:

Est ce que les agent de contraste sont des colorants (autres que DAPI et Intercalant) qui sont utilisé sur des cellules de préférence morte ?

je sais pas si je me suis faite comprendre..
Merci !!! :bye:

par **Avendil** » 27 Oct 2014, 10:11

Les intercalent tuent pas la cellule, c'est nous qui la tuons pour qu'ils fonctionnent il me semble.
Après si les agents de contraste sont considérés comme des colorants, la réponse m'intéresse aussi ^^

par **Chloette** » 27 Oct 2014, 10:17

Avendil a écrit:Les intercalent tuent pas la cellule, c'est nous qui la tuons pour qu'ils fonctionnent il me semble.

Je suis d'accord avec toi! :lool:

On va tuer la cellule dans le sens ou on va être obligé de modifier la perméabilité de notre membrane pour les faire passer et cette modification induit la mort de la cellule il me semble

par **levure** » 27 Oct 2014, 18:14

Salut !

Quand on parle de fluorescence induite, ça peut être l’hoescht, le DAPI (pas besoin de perméabilisation) ou les agents intercalants qui eux vont nécessiter la perméabilisation de la membrane et donc la mort de la cellule.

De toute façon, même quand on est pas obligé de tuer la cellule, les agents intercalants peuvent bloquer la réplication ou entraîner des mutations lors de la réplication donc c’est quand même nocif pour les cellules. Pour l’iodure de propidium en tout cas il faut perméabiliser la cellule et donc la tuer.

Le formaldéhyde peut être utilisé sur des cellules vivantes mais la fixation va les tuer :cry:

Le formaldéhyde et le glutaraldéhyde sont des agents de fixation mais pas des colorants alors que le tetroxyde d’osmium fait les deux.

Les agents de contraste sont pas des colorants puisqu’ils ne colorent pas, ils vont juste nous aider à mieux voir les contrastes grâce à l'angle d'incidence avec lesquels on les projète. Ce sont pas vraiment eux qui tuent la cellule puisqu’on les utilise en microscopie électronique en transmission, on est donc sous vide :arrow:

les cellules sont déjà mortes :cry: