FISH

[TORRM]

Bonjour!!

Alors j'aurai aimé quelques petites précisions sur ce bon vieux FISH ....

J'ai regardé pleins de post mais je n'ai pas trouvé ma réponse ... Alors go !

Donc pour Le FISH il y a dénaturation donc nos cellules observé sont mortes

Alors lorsque la prof précise le type de préparation sur lesquels on peut faire un FISH elle nous parle de préparation métaphasique de tissus frais/vivant .
Bon je comprend que pour avoir des mitoses il faut des cellules vivantes.

Donc on a des cellules vivantes pour ce cas qu'on tue au moment de la mitose en leur faisant le FISH????

Pour les autres cas les échantillons de départ ne nacessite pas d'être vivant avant hybridation .

Donc quelque soit le type de préparations de départ frais/mort le FISH dénature la cellule et la tue .

Et la question qui tue ....... Est ce que du coup pour travailler sur la localisation de l'ARN , pas de dénaturation car simple brin donc les cellules étudiés sont vivantes???

Voilà merci d'avance !!!!!

[MBrown]

http://www.nature.com/scitable/topicpag ... n-fish-327

Google est ton ami

[TORRM]

Thanks for your help MrBrown!! But la technique d'hybridation j'ai compris c'est juste pour avoir quelques petites confirmations et ce magnifique article in Inglish ( où Google me traduit FISH par "poisson" ) ne m'a pas apporté les réponses que j'attendais .

Merci quand même !

[MBrown]

tape: fluorescence in situ hybridization et demande les résultats en français tu verras ça va tout de suite mieux !

[MBrown]

en faite on perméabilise la membrane de la cellule pour faire le fish

-A/Préparation des cellules :

Cette étape est cruciale : en effet, il s'agit de bien préparer les cellules pour un résultat optimal. Différents prélèvements sont utilisés : Lymphocytes (globules blancs), moelle osseuse, coupes de tissus, cellules isolées (urine, liquide amniotique, frottis buccal)
Il faut ensuit fixer les cellules grâce à certaines substances : en effet, des cellules mal fixées présentent un risque de lyse. Différentes méthodes comme la digestion enzymatique permettent ensuite la perméabilisation des cellules en vue de l'introduction des sondes. On place les cellules sur une lame préalablement traitée pour qu'elles s'y accrochent. On chauffe celle-ci à environ 40°C dans une solution tampon qui va dénaturer les brins d'ADN, c'est à dire les séparer. Cette solution contient environ 50 % de formamide, substance favorisant la rupture des liaisons hydrogènes entre les bases azotées.

[MBrown]

la en français tu va a préparation du matériel biologique : http://www.snv.jussieu.fr/~wboudier/ens ... rs-HIS.pdf

[TORRM]

Purée c'est le why dans ma tête!!

Pour moi :

Fixation = arrêt du métabolisme cellulaire mais permet de garder les liaisons chimiques stable = tue la cellule (cellule meurt mais ça évite que tout parte en cacahuete dans le cellule)

Perméabilisation de la membrane = trou dans la membrane = tue la cellule

Donc on étudie des cellules mortes dans les 2 cas ADN et ARN ou j'ai rien compris ?????

[MBrown]

Purée c'est le why dans ma tête!!

Pour moi :

Fixation = arrêt du métabolisme cellulaire mais permet de garder les liaisons chimiques stable = tue la cellule (cellule meurt mais ça évite que tout parte en cacahuete dans le cellule)

Perméabilisation de la membrane = trou dans la membrane = tue la cellule pas forcement : sonication ca tu pas la cellule

Donc on étudie des cellules mortes dans les 2 cas ADN et ARN ou j'ai rien compris ?????
J'ai compris comme toi que pour le fish la cellule est morte

[MBrown]

En tout cas à partir du moment ou on fixe la cellule elle meure !

[levure]

Salut!

Déjà merci MBrown!!

Pour toute introduction de sonde fluorescente de FISH dans ta cellule tu vas devoir la perméabiliser et donc la tuer!
(Avant de la perméabiliser, tu vas la fixer pour garder la bonne organisation interne, donc c'est plutôt la fixation qui va tuer la cellule)

Qu'on étudie l'ADN ou l'ARN, la cellule est morte

[TORRM]

Okééééééééé ! Ho capito !

Le truc c'est ça!! c'est que pour introduire une sonde de FISH t'es obligé d'imperméabiliser la membrane et en plus de fixer le tissu avant, en fait je mélangé un peu avec la transfection d'un gène hybride ou t'es pas obligé d'imperméabiliser la membrane ... (bref je raconte ma vie !!)

Merci pour ta confirmation Levure !!!!! et Merci pour tes explications MBrown !!!!

[MBrown]

Tekass sa FIXE mes connaissance de répondre