Le forum officiel du Tutorat Niçois

par **mariieyep** » 15 Oct 2014, 08:10

Coucou

alors j'ai du mal a comprendre comment Rip peut être supérieur a Rc vu que RC correspond a la quantité PCR de l input il sera toujours plus grand voir égale à celle dans le precipita non ?? Enfin je me doute que mon raisonnement est faux mais je comprends vraiment pas grand chose a cette immunoprecitation ^^

par **TORRM** » 15 Oct 2014, 16:46

Cc mariieyep !

Alors je vais te dire ce que moi j'en ai compris de tout ça...

Dans le chip tu cherches à savoir si un gène s'exprime ou pas en ciblant les modifications post traductionnelle des histones .
Donc tu connais la séquence de ton gène que tu souhaite étudier .

Tu fais toute la technique et tu finis par récupérer ton immunoprécipitat ou tu as ton ADN qui est enrichit de la modification que tu as ciblé.
Tu vas chercher à savoir si cette ADN enrichit contient la séquence du gène qui t'interesse.

La tu vas amplifié par PCR non pas tout l'ADN mais spécifiquement la séquence du gène que tu souhaitais étudier au départ.

Tu vas amplifier cette séquence dans l'immunoprécipitat (ADN enrichi) = Rip
Tu vas amplifier cette séquence dans l'Input (ADN de départ) = Rc

Donc la PCR va amplifié spécifiquement cette séquence dans les deux cas.

ça permet déja de déterminé que ton géne étudié est bien présent dans l'immunoprécipitat .
Si il est présent dans l'immunoprécipitat c'est qu'il est associé à la modif d'histone ciblé et vu que ton Immunoprécipitat ne contient que cette modif il sera sup au témoin Rc qui lui contient l'ADN non enrichi.

Donc si Rip >>>Rc la séquence qui nous intéresse est bien associé à la modification post traductionnelle .
= il y a eu enrichissement de la séquence d'ADN

Voilà j'espere que ça t'aidera et que je me plante pas trop ...