Hybridation in-situ détection directe

[Zork]

Salut !

Petite question qui n'a pas du être posée sur le forum par rapport au fonctionnement du FISH, dans la ronéo de l'année dernière on sait que le FISH est une sonde complémentaire de l'ARN/ADN et que celle-ci peut avoir une fluorescence directe si elle est couplée à un chromophore Je voudrais savoir si la sonde est fluorescente tout le temps où si elle ne l'est que si la sonde complémente l'ADN (un peu comme en biomol où une certaine molécule devient fluorescente si on a un double brin d'ADN qui se forme) ou est-ce que l'on va pouvoir observer une fluorescence constante de cette sonde peut-importe où elle sera dans la cellule ?

Dans le second cas, comme dire si la sonde fonctionne ou ne fonctionne pas au final ?
Merci !
Zork

[Vega17817]

Coucou

Je dirais qu'elle n'est fluorescente que si elle se complémente avec un brin d'ADN ou d'ARN
C'est pour pouvoir observer des séquences particulières de gènes, les centromères ou encore les chromosomes eux-mêmes (#peinture chromosomique ) du coup si elle était fluorescente tout le temps... Ça serait pas super logique! :hypnotized

Mais attends confirmation des tuteurs, parce que c'est vrai que c'est pas explicité dans le cours... Du coup je dis peut être des bêtises
Bonne fin de journée!!

[cece]

Salut

Alors je pense que la sonde peut être tout le temps fluorescente, notamment si tu greffes des fluorochromes dessus et que tu envoies une lumière qui les existe, ils vont émettre de la lumière dans tous les cas.

Ensuite tu peux aussi hybrider tes sondes avec l'ADN ou l'ARN, puis les rendre fluorescentes avec le mécanisme d'immunofluorescence d'Antigène/Anticorps, dans ces cas là on parle de fluorescence indirecte

Apres dans le cas de la fluorescence induite, t'as les colorants comme le Hoechst et le Dapi, ou les intercalants comme le bromure d'éthidium et l'iodure de propidium qui en se fixant aux acides nucléiques deviennent fluorescents.

Je sais pas si c'est plus clair pour toi ?

Bon courage

[Vega17817]

Oh, je confondais avec la fluorescence induite alors

Mais du coup.. Je comprends pas très bien le principe du FISH ..

[MrCitron]

Salut à vous

Alors en fait l'avantage du FISH c'est qu'il permet de cartographier de manière spécifique des gènes ou des séquences quelconque d'ADN étant donné qu'il est basé sur le principe de complémentarité, chose qui nous est impossible avec la fluorescence induite (étant donné qu'on aura une coloration des bases A-T ou de toutes les bases selon le colorant)
Cette technique peut être utilisé pour détecter une surexpression d'un gène (très utilisé en cancérologie ou la surexpression d'un gène peut induire la tumérisation des cellules) ou la présence d'un chromosome sus/sous-numéraire (dans les cas de trisomie par exemple) et possède encore tout un cas d'autres applications dans la génétique

C'est bon pour vous? Bonne journée

[Vega17817]

Ta réponse est parfaite

Mais du coup, une autre question me vient à l'esprit (pardooon )

Est-ce que l'immunofluorescence (flurescence indirecte) sur l'ADN (anticorps anti-ADN ) sera tout aussi spécifique que la FISH ? Ou pour voir comme tu disais par exemple une sur expression d'un gène sera-t-il préférable d'utiliser la FISH?

Merci d'avance !

[MrCitron]

Alors chose très importante, il n'existe pas d'AC anti-ADN, les AC ne reconnaissent que les éléments de nature protéiques, donc lorsque tu voudras admirer de l'ADN tu utiliseras une sonde ou bien un colorant

C'est bon pour toi?

[Vega17817]

C'est ce que je me disais..
Du coup par rapport à la réponde de cece ce sont donc sur les sondes qu'on applique l'immunofluorescence c'est ça? (#grand moment de confusion.. Je suis désolée encoré une fois )

Merci beaucoup!

[MrCitron]

C'est exactement ça, soit tu hybride directement tes sondes avec des fluorochromes, soit tu utilise de l'immunofluorescence dessus (vu que tu fabrique ta sonde en labos tu t'arranges pour qu'elle possède une partie protéique histoire d'être reconnue)

[Vega17817]

D'accord!
Dans ce cas j'ai tout compris

Merci tout plein
Bonne fin de journée

[Bluebird]

Je m'incruste

Du coup on ne peut pas perler d'immunofluorescence indirect pour l'ADN mais de fluorescence indirect ?

[MrCitron]

En fait le FISH peut être une forme d'immunofluorescence indirect si tu décide de faire reconnaitre ta sonde par des AC

[Bluebird]

ok merci

[Zork]

Salut,

Je vois que ma question culture générale est devenue question commune sur le FISH Merci aux tuteurs pour leurs réponses si tout le monde a eu sa réponse je passe en résolu

Zork