carte de restriction

[lolo06]

Salut

Je comprends pas vraiment l'exemple du cours , pour quand on rajoute l'insert ca augmente le poids du petit fragment (qui est le fragment qu'on vire pour mettre l'insert justement non ? )

[Escarboucle]

Salut,

Alors en fait si j'ai bien compris "le petit fragment" on le vire pas pour remplacer l'insert. En fait c'est à l'intérieur de ce petit bout qu'on met l'insert!
Du coup si l'insert est correctement rentré dans le petit fragment après découpage du dit petit fragment par des enzyme de restriction celui ci est plus lourd (bah oui vu qu'il a intégré le fragment il est plus gros )
Si l'insert n'est pas rentré correctement dans le petit fragment on s'en rend compte justement parce que le petit fragment est toujours au même poids.

J'espère que ça t'a aider, bonne soirée!

[lolo06]

Salut
merci pour ton explication, c'est tres clair mais je comprends pas pourquoi l'insert va dans le petit fragment et pas dans le gros ?

[Escarboucle]

re

Alors je sais pas vraiment pourquoi c'est sur le petit fragment mais je pense que ça peut varier
Sur ce post La tut de l'année dernière dit que ça varie en fonction des enzymes : viewtopic.php?f=718&t=82704&p=450323&hilit=INSERT+PETIT+fragment#p450454

Donc en gros ça dépend des situation et de où on a décider de le mettre, dans l'exemple du cours la prof a choisi de le mettre dans le petit fragment mais ça change en fonction des vecteurs, des enzymes dispo etc...

[lolo06]

C'est bizarre car quand on parle du gene pour la beta galactosidase par ex ca vietn sur le gros fragment.. bref j'espere qu'un tut va passer par ici

[Luffylink]

Salut

Excellentes réponses d'Escarboucle, merci à toi

L'insert va s'insérer dans le polylinker, une section du vecteur dédiée aux sites d'expression des enzymes de restriction, et certainement à un endroit précis déterminé, j'imagine, par une hybridation forcée des morceaux d'ADN aux deux bouts de l'insert avec des séquences correspondantes sur le vecteur après son ouverture (Coupure à bouts cohésifs, toussa toussa

Une fois l'insert inséré ou non dans le vecteur, on choisit avec intelligence les enzymes utilisées pour délimiter avec précision le lieu d'insertion de l'insert, pour que la différence de poids de fragments soit marquée à l'électrophorèse.

Mon explication est un peu technique, j'espère qu'elle est compréhensible...
C'est bon pour toi ?

[lolo06]

merci