Ronéo 2 page 8

[AdriCaps]

Salut salut !

Je crois que j'ai un problème avec les bornes d'amont et d'aval dans la PCR normal... parce que quand on veut amplifier l'ADNc qui est unique brin on nous dit qu'on le fait avec 2 amorces mais ducoup je comprends pas comment elles se placent sur le brin et comment elles synthétisent sachant que ça doit être en 5'-3' pour les deux...
je sais pas si c'est très clair mais si on pouvait m'aider..

[louuu]

+1, je comprends pas trop où/comment se placent les amorces ...

[Luffylink]

Salut

On souhaite amplifier un fragment d'ADN de 200 à 3000 paires de bases, de séquence inconnue dans tout un brin d'ADN
Pour pouvoir le faire grâce à la PCR, il suffit de connaître, de part et d'autre de ce fragment à amplifier, des petits bouts de 18 - 20 pb : ces bouts constituent les bornes d'amont en 5' et d'aval en 3', sur lesquels vont s'hybrider les amorces

C'est déjà mieux ?

[louuu]

bof... ça veut dire que sur le simple brin d'ADNc, y a une amorce "au dessus" et une amorce "en dessous" ? j'arrive pas trop à visualiser comment ça se fait ...

[Luffylink]

Les deux amorces se trouvent sur le même côté, schématiquement

Elles s'hybrident sur le brin d'ADN pour encadrer la région qui sera amplifiée

C'est comme pour une réplication, avec une amorce qui initie la synthèse d'ADN, sauf que dans ce cas, le brin d'ADN est déroulé, il n'est pas en hélice, et une autre amorce se situe un peu plus loin sur la route de l'ADN polymérase pour terminer la synthèse

Comprenez bien que chaque amorce ne signifie pas un début de synthèse : il y en a une qui signifie un début de synthèse d'ADN et l'autre signifie la fin de cette synthèse

[louuu]

ah okay ! j'ai compris merci bcp

[AdriCaps]

Moi aussi c'est bon merci ! ?