Je me suis un peu penché sur le problème, et ... je dois dire que je ne vois pas vraiment de quoi vous avez besoin
Tout ce que je vois qui rentre dans la catégorie "Trucs qui s'accrochent", c'est :
PCR 
Les amorces, ou
primers de
part et d'autre de la région étudiée, sont des fragments connus d'une vingtaine de paires de base qui servent à cerner la région à amplifier
Dans la PCR en temps réel : SYBR Green s'intercale
dans la séquence double brin étudiée durant les élongations de PCR
TaqMan s'hybride à une séquence encore simple brin, puis se fait éjecter durant l'élongation, séparant le quencher du fluorochrome
Vecteur de clonage La composition du vecteur de clonage et d'expression
est à connaître, vous la retrouverez dans la ronéo 2
NGS Les
adaptateurs sont des séquences connues ajoutées à tous les fragments d'ADN pour une manipulation plus pratique. Elles servent à
rendre identiques tous les extrémités :
P1 se trouve en 3', et peut être couplé à une séquence d'accroche à la sphère A se trouve en 5' et peut être biotynilé pour une étape de sélection NB : les positions 3' et 5' sont particulièrement à retenir pour la première étape de l'amplification. Partant de cela, on peut reconstituer le reste des étapes grâce à un processus logiqueLe code-barre BC est une
étiquette accrochée au fragment d'ADN (situé entre le fragment et A), pour différencier les fragments d'ADN provenant de chaque patient
Quelques incompréhensions relatives à la façon dont cela est présenté sur les schémas (Position de P1 et A dans une séquence double brin / Présence d'une biotine lors de la fixation à la sphère) devraient recevoir un éclaircissement en début de semaine prochaine Concrètement, c'est le plus gros que vous ayez à retenir, nul besoin de vous prendre la tête
Plein d'amooouuur 
Il faut l'accepter comme il est 
. Ca serait magique 
