Puces à ADN

[Lucastérion]

Salut

J'ai pas trop compris ce qu'est une puce à ADN et en particulier son fonctionnement. Je sais que ça permet d'étudier le transcriptome mais j'ai du mal à comprendre le procédé

Une âme charitable pour m'éclairer?

[Striker spirit]

Hello !

Je vois qu'on prend de l'avance pour le cours de demain

Tu as déjà saisi que l'intérêt de cette technique est d'étudier la transcription d’un gène dans différentes conditions expérimentales (par exemple : en conditions aérobies ou anaérobies)

Considère la puce à ADN comme une grande lame de verre découpée en milliers (si ce n'est millions) de cases.
On fixe des suites de nucléotides correspondant à des séquences précises de gènessur les cases (ou spot) de la lame de verre, qui contiendra l’ensemble du génome de la cellule étudiée.

Marche a suivre: Tu places les cellules (ou extraits cellulaires) dans deux ou plusieurs situations expérimentales (donc dans des éprouvettes différentes)
Tu récupères séparément les ARNs messagers (indicateurs de l'expression génique) que tes cellules ont exprimés dans les différentes conditions.
Tu utilises ensuite une transcriptase inverse, une enzyme qui transforme l’ARN en ADN
Tu équipes tes ADNc obtenus de fluorochromes de couleurs différentes (ex: vert pour l'aérobie, jaune pour l'anaérobie)
Enfin, tu ajoutes les ADNc issus des différentes conditions expérimentales sur la puce à ADN : s’ils s’hybrident (ils le font spontanément quand ils reconnaissent leur séquence complémentaire) on observe une fluorescence,il y a donc expression du gène.

Au final: tu "verses" tous tes extraits cellulaires sur la puce a ADN, et tu observes les fluorescence émises: SI tu as une simple fluorescence (verte par exemple) le gène s'exprime uniquement dans une unique situation, SI tu as une double (ou triple, ou quadruple selon les différentes conditions expérimentales) fluorescence le gène s'exprime dans toutes ces situations

C'est plus clair ?

En espérant t'avoir aidé.

[Lucastérion]

Si j'ai bien compris, ça peut démontrer que l'expression d'un gène est dépendante de conditions bien définis propre à lui?

[Striker spirit]

Exactement !

Tu peux prouver qu'un gène s'exprime dans certaines conditions et pas d'autres : par exemple, le gène de la réparation des dommages UV sur l'ADN est dépendant des conditions extérieures et de la lumière subie par la cellule (Captain' Obvious).
Tu fais ta petite expérience avec et sans lampes UV, tu places la séquence complémentaire du gène de réparation des dégâts UV sur ta puce ADN, tu observes la fluorescence et tu peux tirer tes conclusions

J'espère que ca va mieux, n'hésite pas a passer ton sujet en résolu si c'est le cas !