Ronéo 5, insertion non ciblée de transgène X

[Coconut]

Bonjour bonjour,

Dans la ronéo 5, page 8 tout en haut, c'est dit que pour l'insertion non ciblée, on insère le transgène X et un promoteur hétérologue. Mais pour le Knock-In, qui est un insertion ciblée, on utilise aussi un promoteur. Du coup je suis un peu perdue, parce que je pensais justement que l'insertion non ciblée ne nécessitait pas de promoteur, vu qu'elle était non ciblée...

Le promoteur sert juste à être sur que le transgène est inséré sur le chromosome? Si oui, on l'utilise aussi pour les KO et KD non?

Merci!

[Noëlie]

Moi aussi j'ai un problème avec cette notion car lorsqu'on intégre un gene avec un promoteur (p7) il y'a marqué que le niveaux d'expression du gene intégré aura alors les meme niveaux d'expression que pour un gene naturel.
Or p8 il y'a marqué que lorsqu'on intègre un gene avec un promoteur le niveau d'expression sera différent par rapport au niveau naturel, ce que je trouve faux et en plus contradictoire avec la notion p7.
Est ce que quelqu'un pourrait éclaircir cette partie ?
Merci d'avance

[Striker spirit]

Salut vous deux !

Pour ce qui est des promoteurs (qui est plutôt une notion de biologie moléculaire), retenez qu'ils sont des régions composées d'ADN en amont des gènes, et qu'ils permettent leur expression par le recrutement de la machinerie transcriptionnelle.
Donc, dès qu'on souhaite faire s'exprimer un gène, on insère un promoteur avant le transgène. L'utilisation d'un promoteur s'inscrit dans les cas de trangénèse (quelle qu'elle soit) et de Knock-in, mais pas pour le knock down ou le knock out.

A propos de l'expression du gène (plus ou moins élevée que naturellement) tout dépend de ton promoteur et de l'affinité de celui-ci pour la machinerie transcriptionnelle.

C'est plus clair comme ça ?

En espérant vous avoir aidés

[Coconut]

Pas de promoteur en KO parce que la on veut complètement arrêter l'expression d'un gène, ça c'est ok; mais pour le KD on veut quand même que notre gène qui va donner un ARN bicaténaire soit transcrit...

[Striker spirit]

Re !

Cela dépend du type de knock-down effectué. Soit tu décides de faire synthétiser les ARN interférents par la cellule (et du coup tu utilises un promoteur, nous sommes d'accord ) soit tu libères des ARN interférents en solution (pour graduer ton effet d'interférence en fonction de la concentration) et dans ce cas tu n'as pas besoin d'un promoteur.

C'est tout bon ?

[Coconut]

Oui, merci beaucoup!