Ronéo 4 p12 et 14

[Soso4]

Bonjour !! quelques questions sur la 4ème ronéo de biocell

à la page 12, il y a une phrase que je n'arrive pas à comprendre. On nous parle de l'inactivation d'un gène et on dit : "on sélectionne les cellules résistantes à la puromycine (ok) en cribblant beaucoup les cellules pour trouver où le gène PURO n'aurait pas été intégré au hasard mais par recombinaison homologue au niveau du gène à détruire."

je comprends pas comment on peut savoir si c'est une recombinaison homologue ou due au hasard puisque le gène a de toute façon été intégré...

-toujours avec l'utilisation du gène PURO , je ne vois pas comment on peut "purifier des complexes via les épitopes", je n'arrive pas à voir le lien entre les deux en fait..

-et puis p14: je n'arrive pas à bien comprendre ce que signifie la dernière phrase sur l'haplo insuffisance; pour moi cette notion signifiait la présence "indispensable" de 2 allèles d'un même gène pour que celui-ci s'exprime correctement ..


MERCI BEAUCOUP !!

[Oxo]

D'accord avec toi pour l'haplo insuffisance, là on comprend pas trop si la mutation est récessive ou dominante... pour moi dans le cas d 'une haplo insuffisance elle serait récessive et on a une perte de fonction...

[Soso4]

exactement ahah! merci du soutien en espérant qu'un tuteur passe par là !

[levure]

Salut!

Pour la recombinaison homologue, je pense que le prof s'est juste un peu mal exprimé.
Les cellules qui seront résistantes à l'antibiotique seront celles qui ont intégré le gène par recombinaison homologue OU par recombinaison illégitime. Et c'est parmi ces cellules qu'on va effectuer un criblage pour essayer de trouver lesquelles ont intégré le gène par recombinaison homologue (bien sûr ces techniques de criblage ne sont pas à connaître )


Par rapport à l'immunoprécipitation, en fait c'est tout simple
on va faire exprimer une protéine à une cellule via un transgène (cette protéine est "marquée" par un épitope, c'est à dire qu'on a des anticorps capables de reconnaitre cette protéine). On faire passer dans la cellule des anticorps qui vont reconnaitre la protéine et on récuperera le complexe immun antigène/anticorps.
On récupère donc la protéine codée par le transgène. Si jamais on récupère d'autres protéines en même temps, ça voudra dire que ces protéines interagissent avec la protéine codée par le transgène dans la cellule et qu'elles peuvent donc former un complexe protéique dans la cellule.
(En gros si les protéines forment un complexe, si on en attrape une, les autres viennent avec)
On utilise donc la méthode d'immunoprécipitation de complexe pour étudier les interactions d'une protéine dans la cellule

Alors maintenant l'haplo-insuffisance
C'est des situations où on va observer un phénotype mutant dans une cellule avec une mutation récessive (perte de fonction) sur un seul de ses 2 chromosomes homologues (généralement le phénotype mutant est moins prononcé que le phénotype d'un mutant homozygote)
C'est tout simplement que la présence d'une seule copie du gène ne suffit pas à avoir un phénotype sauvage. Cependant, on a pas non plus le phénotype muté caractéristique qu'on aurait eu avec une mutation homozygote récessive.

J'espère avoir répondu à vos questions mais si c'est pas le cas n'hésitez pas

[Soso4]

Ok super!!!! merci beaucoup pour ces éclaircissements !! bonne soirée !