électrophorèse/hybridation

[umoteck]

Salut!

Trois petites questions:
1) Dans la ronéo 3, il est dit que l'électrophorèse sépare par TAILLE (PAS de mention de la masse) or pour le southern blot les protéines sont séparées par MASSE donc est-ce que c'est un oubli de la définition où est-ce qu'il y a un truc que je pige pas?
2) Dans le recap final: il est dit qu'en refroidissant l'ADN il se recombine correspondant à l'étape d'hybridation or cette étape selon la ronéo 1 est à 55°C, c'est pas très froid ?!
3) question sans doute sans intérêt mais sait-on jamais: la méthode de Chomzynsky est la méthode de référence pour le Northern mais l'est-elle aussi pour le southern et le western ?

Merci.

[umoteck]

[Gollume]

Salut!
Hello
Trois petites questions:
1) Dans la ronéo 3, il est dit que l'électrophorèse sépare par TAILLE (PAS de mention de la masse) or pour le southern blot les protéines sont séparées par MASSE donc est-ce que c'est un oubli de la définition où est-ce qu'il y a un truc que je pige pas?
en fait, vu que chaque fragment d'ADN est fait de la même façon, si un fragment est + long, il sera + lourd par conséquent. Donc une séparation de fragments d'ADN en fonction de la taille correspond à une séparation de fragments d'ADN en fonction de la masse

2) Dans le recap final: il est dit qu'en refroidissant l'ADN il se recombine correspondant à l'étape d'hybridation or cette étape selon la ronéo 1 est à 55°C, c'est pas très froid ?!
Non effectivement c'est pas très froid lol, mais c'est + froid que 95° et 72°, donc c'est considéré comme "froid". ou en tout cas l'ADN est refroidit pendant l'hybridation (passage de 95° à 50-55°)

3) question sans doute sans intérêt mais sait-on jamais: la méthode de Chomzynsky est la méthode de référence pour le Northern mais l'est-elle aussi pour le southern et le western ?
alors visiblement la méthode Chomczynski est une méthode d'extraction d'ARN et non de "northen blot" qui est l'analyse directe de l'ARN. En comparant les étapes de l'extraction d'ADN et d'ARN tu vois qu'elles sont un peu différentes. Mais je pense qu'on s'en fout un peu pour le cours, dans la ronéo il est d'ailleurs écrit "pas besoin de connaître le détail exact de chaque étape...". Donc si tu veux, retiens que la méthode Chomczynski est la méthode de référence pour l'extraction d'ARN. Et je pense que c'est suffisant
Merci.
Derien , n'hésite pas si besoin

[umoteck]

PARFAIT! merci