Tube - méthode Sanger

[Clémencéphale]

Bonjour

J’ai une petite incompréhension à la page 9 de la ronéo 1 on nous dit que dans un tube pour la méthode Sanger on doit y ajouter des dNTPs et ensuite on nous dit cette méthode ajoute des ddNTP et encore après on nous dit que l’ADN polymérase ajoute au hasard des dNTP ou des ddNTP.
Alors question dans un tube on y ajoute que des dNTPs que des ddNTPs ou les 2 ? Et si ce n’est pas les 2 comment l’ADN polymerase incorpore les deux types au hasard ?

Merci BEAUCOUP de votre aide !!!

[Lilou Sanger]

Coucou !
Alors enfet dans ta méthode Sanger tu auras 4 tubes différents, et dans chaque tube tu auras les 4 types de dNTPs ( A T C et G) ET un seul type de ddNTPs ( donc A, T, C OU G)
Du coup dans un tube tu auras des dNTPs et un type de ddNTP
Après, on a la Taq polymérase qui va vouloir incorporer par exemple un A, donc dans le tube contenant les ddNTPs A, elle pourra au hasard prendre un A dNTPs ou ddNTPs ( c'est là que ca se complique )
Les ddNTPs vont stopper la synthèse par la Taq polymérase lorsqu'ils seront incorporés
Donc après selon la taille du fragment formé on aura l'enchaînement des nucléotides
J'éspère que c'est plus clair pour toi, sinon n'hésite pas j'essaierai de réexpliquer d'une autre manière :*

[Clémencéphale]

Alors déjà merci ÉNORMÉMENT pour tes réponses depuis le S1 vous êtes vraiment vraiment exceptionnelles (je pèse mes mots) !
Et je crois avoir tout compris donc encore une fois merciiii sauf un petit point (désolée !) dans un tube pour la méthode Sanger du coup on met des dNTP ET des ddNTP ou juste que des dNTPs (comme c’est marqué en recap ronéo)

[Lilou Sanger]

Trop mimi merci !
Alors du coup dans un tube pour le séquençage Sanger tu auras les 4 types de dNTPs (ATCG) et UN SEUL ddNTP ( A, T , C OU G )

[Clémencéphale]

Ahhh !! Vraiment merci de prendre du temps pour faire des explications au top du top, dès qu’on les voit on sait que ça restera longtemps gravé dans ta mémoire !! Vraiment merci du fond du cœur

[Lilou Sanger]

J’en ten prie c’est avec plaisir ❤️
Merci à toi ça fait chaud au coeur 💓

[Claire.barussias]

hello, je ne comprends pas par exemple dans un tube conteneant la ddntpA comment on peut avoir des fragments qui ont une nombre de paire de base croissant au fur et a mesure que l'operation se repete en finissant chacun par A evidament parce que la ddntp A dans son tube respectif permet de stopper la replication par la taq polymerase au nucleotide A. Je pensais qu'une fois que la ddntp avais stoppée la synthese par la taq polymerase l'operation s'arretait et on avais un seul fragment par tube donc un fragment pour le tube contenant la ddntpg, un pour la ddntpa, un pour la ddntpc, et un pour la ddntpt.
peut tu m'emplique stp? merci d'avance

[Lilou Sanger]

Coucou
On a 4 tubes
Dans chaque tube on a les 4 types de dNTPs, et un seul type de ddNTPs
A chaque fois que la Taq ajoute un ddNTP; ça stoppe la synthèse
Mais elle le fait plusieurs fois, ce qui donne plusieurs fragments différents
Donc dans chaque tube on a pas un seul fragments mais un exemple multitude, ce qui permet après d’avoir l’enchaînement des nucleotides 🤓

C’est bon pour toi?