Salut Adada4 !Alors je vais essayer de détailler un maximum et tu me diras si c'est bon ou s'il faudrait que je reformule !
On a 2 molécule (NIPP1 et PP1) dans la cellule et on ne sait pas si elles sont proches, si elles interagissent ensemble...
On va donc associer à chacune de ces protéines 1 fluorochrome, on aura alors :
CFP-NIPP1 on associe de la CFP à NIPP1. La
CFP est excité par un photon de longueur d'onde d'environ
430nm et aura une longueur d'onde d'émission autour de
470nmYFP-PP1 on associe de la YFP à PP1.
YFP est excité par un photon de longueur d'onde d'environ
470-500nm et aura une longueur d'onde d'emission autour de
530nm Donc la longueur d'émission de la CFP est dans le spectre d'absorption de la YFP ! et on sait (principe sur lequel repose le FRET), que si 2 fluorochromes dont l'un a un spectre d'émission superposable au spectre d'absorption de l'autre, alors ces deux fluorochromes pourront interagir si ils se trouvent à moins de 10nm !
(un peu lourd comme phrase désolée) En clair : si le CFP est assez proche de YFP et que le CFP est excité alors l'énergie émise par le CFP après excitation ira exciter à son tour le YFP !
(finalement c'était censé être plus clair mais ça l'est pas tellement) Par conséquent, si on excite notre cellule avec une longueur d'onde de
430nm, et qu'on observe ensuite une longueur d'onde de
470nm, on peut déduire que le CFP a été touché, mais pas le YFP ! Le CFP et le YFP sont donc éloignés de plus de 10nm, NIPP1 et PP1 sont donc éloignés de plus de 10nm, donc ces deux protéines n'interagissent pas ensemble !
Si on excite notre cellule avec une longueur d'onde de
430nm, et qu'on observe ensuite une longueur d'onde de
530nm, on peut déduire que le CFP a été touché, a émis à
470nm, ce qui a excité la YFP qui a alors émis à
530nm !
Le CFP et le YFP sont donc éloignés de moins de 10nm, NIPP1 et PP1 sont donc éloignés de moins de 10nm, donc ces deux protéines interagissent ensemble !
Je reviens pour la suite dans 2 minutes !
)
) 