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Diapo 72 poly 3


Diapo 72 poly 3

Messagepar paulineoz » 11 Nov 2013, 15:26

Salut !
alors sur cette technique je vois pas comment on met en evidence les mutations ? Une foisl electrophorese de faite , on va voir des fragments de tailles differentes selon la ou ont coupes les ddNTP . Mais comment on remarque la presence d une mutation ? est ce que la ddNTP coupera a different endroits ? ( on en revient donc a la recherche indirecte non ? )
Merciiii :)
paulineoz
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Re: Diapo 72 poly 3

Messagepar Gloria » 19 Nov 2013, 11:28

Coucou

alors ça a l'air un peu embrouillé dans ta tête … les ddNTP ne coupent pas !! ^^

Les ddNTP sont des nucléotides auxquels on a modifié une extrémité OH du coup ils ne peuvent pas se polymériser: c'est pour cela qu'on les appelle les terminateurs de chaine.

Pour les voir on les couple à un fluorochromes. Chaque ddNTP est couplé à un fluorochrome différent: donc si tu répliques ton ADN et que tu insère un ddNTP couplé à un fluorovhrome rouge tu sais que tu viens d'incorporer un A par exemple! mais ce A ne pourra pas faire de liaison !

Donc petit à petit a force de d'intégrer tes ddNTPs dans les différents portion synthétiser à partir de ton ADN matrice , tu vas avoir tous pleins de fragments de différentes tailles avec à la fin un terminateur de chaines de différentes couleurs !

Donc tu les ranges par taille (vive les electrophoreses) et tu peux retracer la séquence du fragment d'ADN dont tu voulais connaitre la séquence ^^ ( bon ça c'est plus la méthode Sanger mais c'est un peu le meme pop pour la PCR )

Donc si il y a une mutation ton fragment sera plus grand -> s'il y a insertion de bases
Ta protéine va être plus legere s'il y a une mutation genre délétion -> ta protéine migrera plus loin sur l'electrophorese !

Voila j'espère que c'est plus clair et que c'est correct tout ce que je t'ai raconté ! Si Lady Vic pouvait confirmer ça serait gentil :)
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Re: Diapo 72 poly 3

Messagepar Lady Vic » 19 Nov 2013, 21:08

Gloria a écrit:Voila j'espère que c'est plus clair et que c'est correct tout ce que je t'ai raconté ! Si Lady Vic pouvait confirmer ça serait gentil


Je confirme ;) J'adore quand vous vous entraidez <3

Bonne soirée et bon courage !!!
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Re: Diapo 72 poly 3

Messagepar paulineoz » 22 Nov 2013, 08:44

Coucou !
Merci bcp ! J'avais pas vue ca comme ca effectivement !
Encore merci :D
paulineoz
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Re: Diapo 72 poly 3

Messagepar Tess976 » 23 Nov 2013, 16:45

Coucouuuuu :) Une petite question supp' :)

Alors une fois qu'on a la séparation par taille par électrophorèse, on a une protéine normal test et une autre muté par exemple, et on voit là où le fragment est raccourci/rallongé, et on peut en déduire donc dans quelle portion du gène la mutation apparait ou pas ? :)


Voilou, j'ai du mal à comprendre la PCR... Peut être que cette future réponse m'aidera ;)

(Paulineoz, si tu peux enlever le résolu, ce serait super !!! Merci :D )

Bonne soirée :)
:) TUTRICE BDR 2014-2015 :)

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