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4 petites questions à propos de la transgenèse...


4 petites questions à propos de la transgenèse...

Messagepar Le Chat » 22 Oct 2014, 21:22

Hello les tuts de Biocell ! Je me pose 4 questions existentielles à propos de la transgenèse...
(oui je suis en train de revoir la ronéo n°4 et alors ? Je vous vois vous tous, les doublants, qui me regardez d'un air supérieur avec votre ronéo n°15 bien en main :cry: :lol: )

-Alors, je me demandais tout d'abord pourquoi privilégie t-on la recombinaison illégitime ? Certes c'est plus "pépère" à réaliser mais c'est bien moins efficace que la recombinaison légitime... D'un point de vue expérimental mais surtout thérapeutique... :confused:

-Ensuite, je n'ai pas compris ce passage "Exprimer des protéines étrangères permet [...] La purification de complexes via les épitopes (immunoprécipitation)." Je ne connais pas le principe de l'immunoprécipitation je viens d'utiliser la fonction recherche, et c'est bon :lol:

-On peut surexprimer un gène avec la recombinaison illégitime chez les souris, on à l'exemple des souris géantes.... La question qu'on se posait c'était: Est ce que l'on régule en fonction de la "dose" de gènes transférés ou est ce simplement en donnant des gènes humains que la souris les exprime plus "fortement" car ils ne lui sont pas adaptés ? (Sherlock, PL et Kinésine <3 )

-Enfin, j'ai vraiment rien pigé à l'intégration ciblée d'un gène afin d'en inactiver un autre chez la souris... Je ne pige pas vraiment à quel moment précis la population F1 est obtenue... ? (dans le cas des souris mozaïques) Après un nombre indéterminé de croisements oui, mais comment ce font ces croisement, c'est ça que je ne comprend pas... (Souris porteuse de la mutation encore inexprimée avec une autre dans le même cas, ou alors avec une ayant des allèles 100% sauvages... ? )

Désolé pour ce Big post... Merci d'avance :D
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Re: 4 petites questions à propos de la transgenèse...

Messagepar Beezi » 23 Oct 2014, 12:59

Salut :)

Pourquoi privilégie t-on la recombinaison illégitime?
Tout simplement parce que la recombinaison ciblée, il va falloir créer un gène cible en labo et ça va couter plus cher.

La question 2 j'ai pas compris désolé :)

Pour la dernière je vais essayer de t'expliquer la partie.
L'objectif c'est d'inactiver complètement un gène. En gros notre souris a un génome sauvage et on veut qu'il soit entièrement muté.

On va prendre des Cellules souches embryonnaires, on va intégrer notre gène muté et on va obtenir des cellules mosaïques. Ca veut dire que toutes les cellules des souriceaux n'ont pas intégré le gène muté. En gros notre souris mosaïque elle a une partie de ses cellules qui est mutés et une autre qui est sauvage.
Nous on veut que toutes les cellules de la souris soient mutées homozygotes.

On va prendre nos souris mosaïques et ont va les coupler entre elles, du coup elles vont donner des souris hétérozygotes pour la mutation et des souris sauvages.
Capture d’écran 2014-10-23 à 13.50.21.png


Tu voulais savoir comment se faisait les croisements, c'est simple, tu énumères toutes les possibilités:
- la mosaïque elle peut donner un gène sauvage et un muté
- la sauvage elle peut donner deux gènes sauvages

Après ce premier croisement on a obtenu des souris hétérozygotes, on va donc les croiser entre elles pour obtenir des souris homozygotes à la mutation.
Capture d’écran 2014-10-23 à 13.55.26.png


On obtient alors des souris homozygotes à la mutation. On est donc passé de souris sauvages à des souris mutés entièrement, on a bien réussi à désactiver notre gène.
Imagine que le gène qu'on a cherché a inactivé c'est la couleur blanche des souris. Si on le désactive elle deviennent orange (j'invente) et bien au début de notre expérience elles étaient blanches et à la fin on peut coupler les souris mutés et ça donnera que des souris oranges (entièrement mutés).

C'est ça le principe à retenir =)
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Re: 4 petites questions à propos de la transgenèse...

Messagepar Le Chat » 23 Oct 2014, 13:51

TOP ! Merci pour tes réponses ! :D

La question que j'ai mal formulée concerne l'implantation d'un oeuf muté dans l'utérus de la souris... On obtient des souriceaux, certains vont exprimer la mutation d'autres non... A propos des souriceaux mutés, il est dit dans la ronéo qu'on peut surexprimer ce gène (en l'occurrence dans l'exemple donné c'est le gène qui donne des souris géantes :sick: ).. Je voulais savoir si cette surexpression du gène était:
-due à la "dose" de mutation transférée, et si c'est le cas on ne maîtrise pas réellement la surexpression car la recombinaison est illégitime et donc on ne peut pas prévoir comment l'intégration va se faire...
-due simplement au fait que c'est un gène humain qui est transféré, impliquant donc une plus grande croissance car la souris n'a pas la même croissance qu'un être humain (me semble t-il)
-due a une autre raison.. ?

Merci encore :)
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Re: 4 petites questions à propos de la transgenèse...

Messagepar Beezi » 23 Oct 2014, 15:02

Ici on synthétise simplement le gène responsable de la croissance chez l'homme et on l'intègre de façon illégitime chez la souris. Et op ça marche, c'est tout!


Les souris répondent généralement de façon similaire aux hommes c'est pour ça que toutes les expériences ont lieux sur des souris en labo :)
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Re: 4 petites questions à propos de la transgenèse...

Messagepar Le Chat » 25 Oct 2014, 15:44

Merciiiiiii :)
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