Immunofloréscence indirecte 2 (la suite du 1)

[Weegun]

Me revoila pour 2 petites questions d'immunoflorescence indirecte =D

Dans la ronéo 2, il est expliqué comment obtenir des anticorps monoclonaux, ça à l'air assez chiant à faire (même si il faut le faire qu'une fois) et je me demande est ce que c'est vraiment nécessaire pour l'immunofloréscence.
Puisque, si j'ai bien compris, les anticorps polyclonaux extraits au début sont tous spécifiques d'un même anti-gène, bien qu'ils se fixent sur différents épitopes de cet antigène. Mais en quoi le fait d'avoir plusieurs anticorps (polyclonaux) fixés à cet antigène est-il un problème pour la suite de l'immunofluréscence indirecte ?
Car après si on envoie un Ac (couplé à un fluo) spécifique d'un des anticorps (polyclonaux) fixés à l'antigène (la prot qu'on veut localiser) il se fixera quand même à son épitope malgré le fait qu'il y ait d'autres anticorps (polyclonaux) fixés sur l'antigène non ?
Et du coup il sera quand même possible de localiser la protéine voulu si je ne me trompe pas.

Question 2, peut on, à l'aide de l'immunofluoréscence indirecte, réaliser un FRET inter-moléculaire ?

Merci d'avance pour vos réponses

[Ondine]

Coucou !
Pour ta première question, j'avoue être d'accord avec toi, au fond je vois pas trop en quoi ça gène, mais en cherchant un peu j'ai trouvé ça :

Anticorps polyclonaux:
- un mélange complexe d'immunoglobulines isolées du sérum sanguin
- Ces anticorps reconnaissent une série d'épitopes différents.
- Ils possèdent une large gamme de sélectivités et affinités. Ceci peut
donner lieu à des réactivités croisées ou à des interférences dans un essai
immunologique.
™ Anticorps monoclonal:
- anticorps spécifique sécrété par les hybridomes produits grâce aux
méthodes de la technologie des hybridomes (impliquant des cultures
cellulaires)
- Il se lie à un épitope particulier .
- Les anticorps monoclonaux sont plus spécifiques et possèdent des
propriétés plus reproductibles. Ils sont les anticorps de choix pour les
essais analytiques.

Je pense qu'il faut juste savoir que les monoclonaux sont mieux pour travailler en immuno ...

Voilà, désolée de l'imprécision de la réponse mais je peux pas beaucoup t'aider plus
@ +

[Weegun]

Ok d'acc merci
Et pour l'histoire du Fret c'est faisable (au cas où ^^)

[Ondine]

Même si je t'avoue n'en avoir jamais entendu parler, je pense que c'est a priori possible.
Je pense que le problème viendrait de la position du fluorochrome sur la protéine, en fonction du lieu de fixation de l'anticorps, ce qui rendrait l'expérience trop aléatoire. Mais ce ne sont que des suppositions

Retiens quand même que ça se fait quasiment toujours avec une protéine hybride

Travaille bien !
@ +