explications d' items

[margaux83]

Coucou,
alors voilà je viens de faire une séance qcm de biocell d'un dm 2010, et malgrè la correction j'ai du mal avec certain et je voudrai en savoir plus. Alors voilà:
-On peut démontrer la localisation d'une protéine X sauvage en utilisant une protéine hybride X-GFP. VRAI car l'hybridation avec la GFP a pu modifier les propriétés et la localisation de la protéine X sauvage. Je trouve la justification bizarre par rapport à la réponse donc j'aimerai en savoir plus ^^

-Du fait de sa forte densité, le nucléole apparaît clairement dans un microscope a contraste de phase (du fait d'un plus grand déphasage). FAUX car le nucléole est une zone très concentré en ARNr, et pré-ribosomes. Donc je suis d'accord avec ça mais j'aimerai juste savoir si du coup il apparaîtra bien en plus foncé? (a moins que j'ai rien compris :s)

-L'utilisation d'anticorps secondaires dans une expérience d'immunofluorescence indirecte permet une amplification du signal lumineux. VRAI plusieurs anticorps secondaires se fixent sur chaque anticorps primaire. Peut-on réellement avoir plusieurs anticorps secondaires sur un seul anticorps primaire? Parce qu'en fait je pensais qu'il y avait un anticorps primaire dirigé contre la protéine a étudier puis un anticorps secondaire couplé a un fluorochrome dirigé contre l'anticorps primaire donc je ne voit pas comment on peut amplifier le signal luminaux, on le crée simplement?

Merci d'avance pour vos réponses

[max.l]

1 : je dirai que c'est faux, surement un petit lapsus

2 : nucléole c'est bien plus dense donc plus déphasé donc plus sombre... item un peu litigieux pr moi parce que du fait qu'il soit sombre il apparait bien mais bon..

3 : tu n'as pas qu'un seul site reconnu par un Ac sur un Ag, plusieurs site de fixation possible.. un meme anticorps va pouvoir reconnaitre plusieurs sites donc si tu mets plusieurs plusieurs anticorps secondaires en présence d'un Ac primaires, plusieurs vont se fixer sur ton Ac primaire ====> amplification

[margaux83]

merci bcp pour tes réponses max

[Zhost]

Coucou.

Pour le 2), j'aurais tendance à dire qu'il est bon.
En contraste de phase, notre image est beaucoup moins brillante.
Or, le nucléole est + sombre. Noir sur noir : on le voit mal.
==> Faux.

Voili, A+

[margaux83]

ah bon et bien alors il va me falloir l'avis d'un tut lol. Merci zhost même si du coup je ne sais plus quoi penser ^^

[Ondine]

Salut !

1) C'est faux bien sur
2) Alors là je vous avoue que je sais pas trop ... Oui le nucléole apparait clairement en microscopie à contraste de phase ... Mais la "densité" dont on parle dans l'item est plutôt évocatrice de la microscopie électronique ... Donc bon. Je trouve cet item trop litigieux, pas assez précis, laissez tomber
3) C'est vrai je confirme, plusieurs anticorps secondaires peuvent se fixer sur un anticorps primaire ce qui donne une amplification du signal

Voilou, travaillez bien !
Et merci à tous ceux qui ont pris le relai des réponses pendant le weekend d'inté

[-Alexis]

Salut à tous !

La 1 est bien fausse, il y a une erreur.

La 2 : attention au sens du mot "clairement" !!! Ici il est utilisé dans le sens clair ≠ foncé !! Donc ici, l'item est faux ! Il aurait été juste si on avait dit : -Du fait de sa forte densité, le nucléole apparaît foncé dans un microscope a contraste de phase (du fait d'un plus grand déphasage).

Pour la 3, elle est bien vraie. Un Ac primaire va par exemple avoir 3 sites de fixations pour les Ac secondaires. Donc, un Ac primaire se fixe sur 1 protéine. Ensuite, 3 Ac secondaires se fixent à cet Ac primaire.

On aurait pu greffer directement le fluorochrome sur l'Ac primaire (et encore, c'est compliqué pour d'autres raisons) mais le signal aurait été faible. Alors qu'en utilisant des Ac secondaires couplés à un fluorochrome et dirigés contre l'Ac primaires, dans l'exemple on a une multiplication de l'intensité de fluorescence par 3.

Voilà, bon courage à tous !

[margaux83]

WAOUWWW deux tuteurs qui me répondent alors là c'est le top en tout cas merci bcp pour vos explications ca me paraît plus clair (sans jeux de mots lol)