séquençage

[Youyou]

Saluuuut,
Serait-il possible de m'expliquer un peu plus en détail la méthode de séquençage de frédéric sanger ?
Merci d'avance, bonne journée

[gabriel]

Ca consiste à realiser une amplification de l’ADN à l'aide d'un petit oligonucléotide (amorce) complémentaire à une partie du fragment d’ADN à séquencer sur le meme principe que la PCR. Les quatre désoxyribonucléotides (dATP, dCTP, dGTP, dTTP) sont ajoutés, ainsi qu’une faible concentration de l'un des quatre didésoxyribonucléotides (ddATP, ddCTP, ddGTP ou ddTTP).

Ces didésoxyribonucléotides agissent comme des terminateurs de chaîne : une fois incorporés dans le nouveau brin synthétisé, ils empêchent la poursuite de l’élongation. Cette terminaison se fait spécifiquement au niveau des nucléotides correspondant au didésoxyribonucléotide incorporé dans la réaction. Pour le séquençage complet d'un même fragment d'ADN, on répète cette réaction quatre fois en parallèle, avec les quatre didésoxyribonucléotides différents.

Et ensuite on migre le tout sur un gel et comme chaque colonne represente un nucleotide different qui se trouve sur un fragment de taille specifique on etablit ainsi la sequence de l'ADN.

[Youyou]

ok merci gabriel

[gabriel]

De rien 