le sequençage

[märine]

salut!!
j'ai deux questions à propos de la methode sanger: qu'est-ce qui fait que l'adn polymerase utilise des ddNTP plutot que des dNTP et inversement?
et apres je n'ai pas tres bien compris la phrase " ils migrent dans des capillaires suffisamment longs pour qu'au bout les fragments soient separes en fonction de leur taille".
voila merci d'avance!!

[Blay]

Salut,
alors je ne peux pas répondre à la première partie de ta question. Je commence tout juste le cours là, mais pour la phrase que tu ne comprends pas très bien ça veut seulement dire qu'en gros ils migrent sur des capillaire long simplement pour qu'il y ai assez d'écart entre les différents bouts de fragments qu'on a obtenu histoire de pouvoir les différenciés, et pas qu'ils soient mélangé n'importe comment sur un petit bout de truc tout ridicule
C'est donc précisé en fonction de leur taille car ils n'ont pas tous la même taille : long/petit/court/immanse (bon tout est relatif, hein?) et il leur faut de la place car il faut prévoir en avance ces différences de taille, sans qu'elles empiètent sur les autres bouts de fragments !
Voilà, du moins ce que j'ai compris.
J'espère que ça a pu t'aider.
J'attend la réponse d'un tut pour ton autre question,

Et à la prochaine,

[Homonculus]

salut!!
j'ai deux questions à propos de la methode sanger: qu'est-ce qui fait que l'adn polymerase utilise des ddNTP plutot que des dNTP et inversement?

Salut,

Il me semble que c'est le hasard^^ Elle prend ce qui lui vient en premier et comme t'as un pourcentage de chaque statistiquement, ça te fait des morceau de toute les longueurs.
Puis, il me semble que les séquence analyser font dans les 300 pb et que si l'on utilise le produit d'un PCR on aura 2^25 à 2^30 séquences (vu que l'on fait "en routine" 25 à 30 cycle) donc t'as de quoi avoir quelque chose de représentatif.

A confirmer par un tut^^

[märine]

ok
c'est ce que j'avai fini par penser mais j'attendais tout de même une confirmation.

merci à tous les 2

[gabriel]

Je confirme.....ça prend au hasard les 2 types de nucleotides....quand ça prend un ddntp c'est un terminateur de sequence et ca nous permet de savoir les positions de nucleotides et donc le sequençage...voila...

[märine]

ok merci pour la confirmation

[gabriel]

de rien