questions RONEO

[Mariiiine]

Bonjour Gabriel !
en refaisant la ronéo, j'ai 4 questions

Ronéo 1 :

*Page 23 : "plasmide (1500pb)" d'où elle le pond ce 1500pb ?? meme sur la diapo en aucun cas je vois 1500... peut etre c'est un exemple mais bizzard vu qu'à coté Chas a mis en photo l'exemple de sa diapo.. bref

Ronéo 2 :
*page 5 tout en bas : "si vous revenez avec vos produits PCR dans la pièce où vous avez amplifié l'ADN du patient, vous pouvez très bien le réamplifier" o_O
je pensais qu'on ne pouvait pas faire retour arrière et que le circuit était MONOdirectionnel ? J'ai pas capté sur ce coup Lol

*Page 7 : en haut : "il faut avoir une ligase qui va permettre de tout refermer" ici on parle de la ligase qui referme le vecteur, une fois l'insert inséré?
Page 7 encore : en bas : "les petites molécules migrent moins que les grandes" c'est étrange il me semblait le contraire...

Merci pour ta présence sur la fofo!

[gabriel]

-pour la page 23 c'est tout simplement faux: le plasmide sans la sequence et sans l'insert fait 2513 (et non pas 1500) car si tu vois pbluescriptIIsk page 22 le plasmide fait 2961 (soit 2513+ sequence sans insert de 448) ou 2961 + insert 500= 3461 = 2513 + sequence avec insert de 948 (448+500)

-roneo 2 page 5:
le circuit est monodirectionnel si on le rend ainsi en respectant le protocole "Comme les produits PCR sont extrêmement volatile, il faut avoir des pièces séparées avec la pièce pré-PCR (ADN génomique, amorces, enzymes) puis les tubes sont refermés, vous sortez de la pièce, vous mettez vos tubes dans les thermocycleurs.
Tout ce qui sort du thermocycleur = tout ce qui est amplifié va dans une autre pièce."
en effet comme les produits PCR que je vais appelé du patien numero 1 (ADN etc.) sont tres volatiles si on n'a pas respecté les protocole (fermer les tubes etc.) si on revient plus tard pour faire une nouvelle PCR du patient numero 2 on risque d'entre autre reamplifié adn du patient numero 1 qui aurait contaminé la pièce...d'ou la notion de circuit monodirectionnel: ne jamais laissé des produit PCR dans un tube en reaction en contact avec l'exterieur pour eviter les contaminations

page 7 en haut: oui c'est bien une ligase pour fermer l'insert inseré dans vecteur
en bas: en effet il y a encore une erreur c'est bien les petites molécules qui migrent plus que les grandes!!
il faudra signaler à Charline ces erreurs ou bien faire un post pour que les autres voient ces erreurs...dslé je n'ai jamais lu ces roneos, vu qu'elles sont sorties assez tard javais deja en ma possession les roneos de l'an dernier et je me suis basé sur ceux la

tu fais bien de mettre le doigt sur ces erreurs!!bravo:)
de tte façon les autres vont voir ce post et corriger leur roneo au pire!
bizzzz

[Mariiiine]

Gabriel, c'est énorme pck quand tu vas dans la catégorie "méthode d'étude et d'analyse du génome" quand tu regardes "dernier message" tout le long tu vois gabriel gabriel gabriel , ca fait plaisir de voir que t'es au taquet sur nos problèmes , chapeau

En ce qui concerne ta réponse, c'est parfait pour tout
MAIS du coup dire "si vous revenez avec vos produits PCR dans la pièce où vous avez amplifié l'ADN du patient, vous pouvez très bien le réamplifier" est correct ou pas?
pck ce que tu m'as dit que le circuit monodirectionnel, je suis 100% d'accord, mais tu m'as pas dit directement si c'était bel et bien une faute de la ronéo^^

Sinon pour le reste MERCI

[gabriel]

Merci c gentil!!content que tu aies compris!!bizzz et courage c bientot la fin!

[gabriel]

La phrase est correct oui; regarde mon explication avec les patients numero 1&2!

[gabriel]

Jaurais peut etre specifié un peu plus comme je lai fait ds mon explication

[Mariiiine]

Ahhh ! en fait pour un meme patient, numéro 1, le circuit est monodirectionnel avec la piece pré ADN, ADN et post ADN
mais si on a un patient numéro 2 dont on veut faire une PCR on peut directement aller dans la salle ADN , et l'amplifier, sans passer par la case pré ADN? évidemment il faut suivre les consignes de sécurité, à savoir fermer le tube etc
en fait je crois que c'est la tournure de la phase de la ronéo qui me gène . dit moi si j'ai tord :

case pré ADN --> adn --> post adn donc MONODIRECTIONNEL mais si on veut le reamplifier, en fait on "retourne" pas en arrière, mais on recommence tout ça avec
pré adn --> adn --> psot adn
t'es d'accord on passe pas de la pase post adn à adn directement ? d'abord ya pré adn puis adn, on fait pas de retour en arrière, meme si on veut réamplifier !

merci davance

[gabriel]

Tu mas un peu perdu la!lol!juste sache qu'il faut eviter les contaminations,fermer les tubes etc pour eviter de reamplifier la mm chose qd on passe dun patient a lautre!ya pas vraiment de case ou de piece differentes etc.bizzz

[gabriel]

C le laborantin qui parle! La bio mol c tres abstrait si on a jamais ete ds un labo,je comprends pkoi c difficile a imaginer!

[Mariiiine]

c'est bon ca marche , je suis partie trop loin haha MERCI

[gabriel]