(RESOLU) Immunofluorescence et noyau

[Fab117]

Helooooo

Je me posais une question par rapport à l'immunofluorescence au niveau du noyau et de la cellule en général.

En effet j'avais cru comprendre que celle ci n'était possible que si les protéine qu'on cherchait a observer se trouver sur la membrane plasmique et que c'etait impossible au sein de la cellule car les anticorps ne pénetrent pas les cellules il me semble ?

Et justement pour le noyaux il parle d'immunoflorescence avec la lamina A et la protéine NuMa mais je pensais que pour ce genre d'observation la technique la plus approprié aurait été la production d'un gène hybride GFP-NuMa ??

Même si c'est peut etre pas important dans le cours, au niveau de la fluorescence ça m'embrouille car quand on parle d'immunofluorescence pour moi ca veux forcément dire avec AC et AG

Voilou et merci de votre soutient

[mowo]

Salut,

Alors pour L'immuno indirect il y a marqué dans ton cours que cette technique possède certains inconvénients comme "Crée des trou dans ta membrane par l’intermédiaire de détergents etc..." donc pour visualiser les protéines dans le cytoplasme on crée des trous dans la membrane (ce qui des fois tue la cellule==> inconvénient) puis on dirige nos Ac+Anti-Ac comme d'habitude.

Pour le noyau je ne suis pas sûr de moi alors je ne vais pas m'avancer la dessus,en tout cas je ne pense pas qu'on puisse utiliser un gène hybride GFP car justement cela pourrai fausser les résultats et ainsi aboutir à de mauvais conclusions (à cause de la modification de la protéine nucléaire naturelle) mais pour le mécanisme...je bloque

Pour moi aussi immunofluo = immunofluo "indirecte" je pense que c'est par abus de langage qu'on dis ca.Voila Bizz

[Choubi]

Alors oui on fait rentrer artificiellement les AC dans la cellules pour pouvoir visualiser Numa et la lamina c'est super fréquent comme technique, d'ailleurs Gigi l'utilise souvent. On parle d'indirecte car tu ne visualises pas directement la protéine mais par l'intermédiaires d'anticorps couplés à des fluorochromes (ça je pense que tu l'avais compris)
En effet, tu pourrais (sans m'avancer non plus car je ne suis pas Gilson) utiliser les gènes hybrides-GFP mais c'est long à faire car tu travailles au niveau du génome, que tu modifies donc tu ne peux rien démontrer et tout et tout..
Alors que les AC, hop tu fais des trous ou quoi, ils sont dans ta cellule, ils ciblent ta protéine et tu check pour regarder.

Voilà, désolé de ne pas pouvoir t'expliquer le pourquoi du comment du choix du professeur Gilson. Je ne pense pas que la deuxième méthode ne soit pas réalisable non plus
Courage, n'hésites surtout pas à redemander si pb est.

[Fab117]

Okiii, en fait j'ignorais que l'on pouvait insérer les AC directement dans la cellule et le noyau!!

Merci a vous deux !!!