QCM 5 concours 2012

[Azula]

Salut

J'ai un petit problème avec cette correction :
D) Vrai : seule la PCR en temps réel permet de faire une quantification
Or je crois qu'il y a aussi le Southern blot ?

Et aussi j'aimerais bien comprendre pourquoi les autres techniques ne sont pas quantitatives. A) PCR "classique"
B) clonage suivi d'une PCR "classique et d'une réaction de séquence
C) PCR classique suivi d'une réaction de séquence

Réaction de séquence veut bien dire séquencage ?
Et le clonage suivi d'une PCR c'est bidon non ? Car le clonage vient après la PCR du fragment d'ADN qu'on veut cloner pour séparer 2 populations et est suivi d'un séquencage pour vérifier l'insert ?

Pourquoi lors de ce séquence de l'insert on utilise 2 amorces alors que la spécificité du séquencage est l'utilisation d'une seule amorce ? Cf diapo 67

Merci beaucoup

[Chob]

Salut !

Oui oui il y a aussi le Southern Blot mais c'est juste que c'est pas dans les propositions de réponses !

Retiens que dès qu'on te parle de PCR classique, c'est qu'on n'est pas en quantitatif.

En PCR classique la mesure se fait au bout de 35 - 40 cycles, au niveau de la phase de plateau dans la courbe. Tu as donc juste la mesure en fin de réaction.

En PCR en temps réel, la mesure se fait tout au long de la réaction à partir du point d'inflexion / début de la phase exponentielle (point qui correspond à la valeur de CT). Du coup tu vas avoir un signal de fluorescence de + en + intense, et c'est pour ça qu'on dit qu'on est en quantitatif.

Je ne peux pas vraiment mieux t'expliquer que je ne l'ai fait dans la ronéo.

Oui réaction de séquence = séquençage, et oui tu as bien le clonage après la réaction de PCR (item bidon)

Pour ta dernière question effetcivement c'est bizarre mais je crois que l'année dernière la prof n'avait pas précisé qu'on utilisait qu'une seule amorce pour le séquençage et elle n'a pas changer son diapo.
Je demanderai aux profs ! ( je récolte quelques questions d'abord avant d'envoyer un mail, histoire de pas leur en envoyant 1 par 1 )

[Azula]

Ok merci beaucoup pour ta réponse, j'ai tout compris et au passage ta ronéo est TOP !

J'attends avec impatience la réponse des profs