Etiquettes TAG

[Léa *]

Bonjour, suite à différents posts et après avoir vu les qcm du cc de 2011, je me demandais si par exple on veut inserer un Tag sur l'ADNc au niveau de N-Term, l'item: "on doit enlever le ATG de l'ADNc" est vrai ou faux? vu qu'il y a écrit doit et pas peut/préférable. De même "l'étiquette (TAG) doit posséder son propre ATG" ?

En revanche pour le C-Term avec le codon stop c'est tjs DOIT ?

Merci

[Cloud]

Salut,

En N-term :
Le TAG doit posséder son propre codon ATG.
Techniquement, si on ne veut avoir que des protéines taguées, on doit enlever le codon ATG de la protéine (sinon elle pourra être synthétisée sans le TAG, ce qui n'a pas beaucoup d'intérêt).

En C-term :
Le TAG doit posséder son propre codon stop.
On doit enlever le codon stop de la protéine (sinon elle seule sera synthétisée, sans intérêt non plus).

Pour l'ATG de la protéine, je te conseille d'attendre l'avis de Chob.

[Léa *]

Cloud sur tous les fronts! Merci

Oui je vais attendre pck c'est ce que je veux savoir^^

[Chob]

Salut !

Cloud a bien répondu mais je vais tout reprendre pour que ce soit bien clair pour tout le monde :

Remarque : la traduction se fait dans le sens 5' vers 3', donc on commence d'abord par l'extrémité Nt de la protéine en allant vers son extrémité Ct !

Si vous voulez mettre un TAG en Nt de la protéine :
=ça veut dire, d'après ce que j'ai dit au dessus, que vous allez rajouter le TAG avant le début de la protéine

En ce qui concerne le TAG :
il faut que le TAG ait son propre ATG, pour initier la traduction ! C'est à partir de cet ATG que va commencer la traduction de la protéine de fusion !
il ne faut pas que le TAG ait son propre codon stop, sinon on aurait uniquement la traduction du TAG ! Or il nous faut la protéine de fusion = TAG + protéine

En ce qui concerne l'ADNc :
il faut que l'ADNc possède son propre codon stop , pour que la traduction se finisse !
il est préférable que l'ADNc ne possède pas son propre ATG, car si c'est le cas on aura la traduction de la protéine seule en plus de celle de la protéine de fusion. C'est donc une question de rentabilité : on s'en fiche d'avoir la protéine seule !



Si vous voulez mettre un TAG en Ct de la protéine :
=ça veut dire, d'après ce que j'ai dit au dessus, que vous allez rajouter le TAG à la fin de la protéine

En ce qui concerne le TAG :
il est préférable que le TAG ne possède pas son propre ATG, sinon on aura la traduction du TAG seul en plus de la traduction de la protéine de fusion. C'est donc une question de "rentabilité" : on s'en fiche d'avoir le TAG seul !
il faut que le TAG possède son propre codon stop, pour que la traduction se finisse !

En ce qui concerne l'ADNc :
il faut que l'ADNc possède son propre ATG, pour initier la traduction ! C'est à partir de cet ATG que va commencer la traduction de la protéine de fusion.
il ne faut pas que l'ADNc ait de codon stop, car sinon on aura jamais la suite de la traduction, c'est à dire qu'on aura jamais la traduction du TAG, et donc jamais la traduction de la protéine de fusion (on aura que la traduction de la protéine seule, ce qui est inutile !)


Schéma qui pourra t'aider à comprendre :

N'essaye surtout pas d'apprendre par coeur, sinon tu vas t'embrouiller à coup sur !
C'est que de la logique, et ce sera plus facile de comprendre avec le schéma

[Léa *]

Oula! Merci bcp Chob! Plus complet que ça tu meurs

J'avais bien compris le système mais pas qd c'est préférable ou obligatoire. Donc la c'est clair merci