Coloration des proteines

[Lééaa]

Bonjour

Ce matin en cours de bioch sur l’électrophorèse, le prof a parlé du B^- mercaptoethanol pour casser les ponts disulfures entre 2 protéines, cela veux donc dire que les ponts disulfures sont les seules liaisons covalentes? Et les seules liaisons interchaines possible entre 2 protéines?

De plus, le prof a parlé de la coloration des protéines, si j'ai bien compris, le bleu de Coomassie se fixe sur les résidus aromatiques des protéines mais ce que je n'ai pas compris c'est que toutes les protéines ne sont pas aromatiques? Après il a directement enchainé sur l'histoire des protéines immunogènes qui sont capable de générer des anticorps contre elles mêmes dans un organisme. C'est ça la solution pour colorer les protéines non aromatiques? On utilise cette technique de double anticorps?

Voila si quelqu'un peut m’éclairer la dessus

[Ceyy]

Bonjour Coucou

Ce matin en cours de bioch sur l’électrophorèse, le prof a parlé du B^- mercaptoethanol pour casser les ponts disulfures entre 2 protéines, cela veux donc dire que les ponts disulfures sont les seules liaisons covalentes? Et les seules liaisons interchaines possible entre 2 protéines? Il me semble que les ponts 2S sont les seules liaisons covalentes au niveau de la structure tertiaire/quaternaire (les liaisons peptidiques sont covalentes dans la structure primaire). Par contre ce ne sont pas les seules liaisons pouvant exister entre deux protéines ! Tu as d'autres types d'interactions (ioniques, hydrophobes etc..).

De plus, le prof a parlé de la coloration des protéines, si j'ai bien compris, le bleu de Coomassie se fixe sur les résidus aromatiques des protéines mais ce que je n'ai pas compris c'est que toutes les protéines ne sont pas aromatiques? Oui c'est ça, les acides amines dont la chaîne latérale a une fonction aromatique : Y, F et W.Après il a directement enchainé sur l'histoire des protéines immunogènes qui sont capable de générer des anticorps contre elles mêmes dans un organisme. C'est ça la solution pour colorer les protéines non aromatiques? On utilise cette technique de double anticorps? Par contre la j'ai pas trop suivi donc je fais appel à.. La Biocell ! Tu verras que tu peux avoir des anticorps primaires sur lesquels tu utiliseras des anticorps secondaires (anti-anticorps primaires) couplés à un fluorochrome ce qui te permet de détecter les protéines lorsque l'anticorps secondaire s'accrochera au primaire.

Voila si quelqu'un peut m’éclairer la dessus

En espérant t'avoir aider ! Bonne journée

[Lééaa]

Alors déjà merci de ta réponse.
OK pour les liaisons, et donc les liaisons ponts disulfures sont, par contre les seules liaisons covalentes interchaines puisqu’il me semble que les liaisons ionique ou encore hydrophobes sont-elles, non covalentes et que même si il existe d'autre liaison covalente mais en structure primaire, cela ne peut pas être interchaines?

Ok merci pour la suite quand même Oui ça je sais oui pour les anticorps secondaires et la fluorochrome et tout, ce qui m’intéresse c'est de savoir si cette technique est utilisée du coup pour colorer toutes les autres protéines non aromatiques?

[Léa_]

Salut !


En effet, on retrouvera essentiellement des ponts disulfure comme liaison covalente interchaîne (de là a te dire que c'est la seule, je ne sais pas si je peux être aussi catégorique, en tout cas on ne vous parlera que de celle ci en biochimie ).

La partie sur la coloration est nouvelle cette année, je me penche dessus et je reviens pour ta dernière question !

[Kick-Ass]

Pour la coloration il a dit en cours qu'il y avait au moins un acide aminé aromatique dans chaque protéine (une protéine d'intéret étant constituée de moultes et moultes acides aminés)

Pour le western blot il a surtout parlé du fait qu'on pouvait rendre les groupements phosphates imunogènes. Je ne pense pas que ca soit à proprement parler pour "colorer la proteine" mais pour cibler chaque groupement phosphate pouvant se fixer sur S T Y, et comparer si ils sont normalement présent ou s'il il en manque.

En effet, la phosphatation étant à la base de nombreuses réactions métaboliques on peut en déduire que si un phosphate manque / est ajoutée de manière non constitutive on pourra retrouver la voie métabolique incriminée et remonter jusqu'a l'origine pathologique.

[Lééaa]

Ok ok merci a vous 2, j'ai a peu près compris