bonjour!
alors pour l'électorophorèse bidimensionnelle on commence tout d’abord par utiliser la focalisation isoélectrique (FIE) : on sépare les molécules selon leur pHi. pour cela on les place sur un gel où le pH varie, on applique un courant électrique et elles migrent en fonction de leur charge :
- lors de la migration vers un pH acide : on a des protéines chargés plus positivement
- lors de la migration vers un pH basique : on a des protéines chargés plus négativement
les charges vont se neutraliser au fur et à mesure de la migration, et la protéine s’arrêtera lorsqu’elle arrivera à une charge nette de 0 (lorsqu’elle atteint son pHi)
ensuite on récupère le gel utilisé pour la FIE, et on le met en haut d’un gel de polyacrylamide. là les protéines migrent selon leur masse moléculaire
(cf. électrophorèse classique) au final tu obtiens une image à deux axes :
- en « ordonnées » : la masse moléculaire
- en « abscisses » : le pHi
il existe des banques de données répertoriant les combinaisons poids/charge normale de chaque protéine à l’état physiologique, et l’intérêt c’est que le gel va être analysé par une machine qui, si elle détecte une combinaison différente de la normale, va le signaler. c’est donc utile en pathologie pour repérer où se trouvent les modifications des protéines pouvant être à l’origine des pathologies.
c'est bon pour toi?
