GFP/YFP

[May']

Bonjour,

J'ai pas compris un truc assez important en fait, fin je suis passée à côté d 'un truc: je m explique.

Par exemple dans l item 10 tutorat 3 on compte D vrai. J'ai vérifier mes espèces, que les fluorochromes soient pas la même et alors là gros bug. Donc GFP et YFP diffèrent par une mutation, ce qui change leur spectre. Jusque là je suis ok. Mais comment on peut affirmer que GFP et YFP vont avoir des spectres qui se superposent partiellement ou qu'ils seront complémentaires comme le sont la GFP et la rhodamine?
Et donc si on est censé le déduire est ce qu'il en va de même pour BFP et CFP ?

Et deuxième question, lorsque l'on dit: on veut observer X et y séparément, est ce qu'il faut que les fluorochromes que l'on greffe aux AC qui viennent de fixé etc soient forcément complémentaires?


Merci Bonne journée

[Captain Shepard]

Yoooooo

Si c'était un FRET on se serait concentré sur le fait que les fluochromes doivent avoir un spectre d'émission et d'excitation qui se superposent mais la c'est juste un cas d'immunofluorescence donc on ne se soucie pas des chevauchements de spectre, il faut juste que les espèces soient différentes et que les couleurs des fluorochromes soient différentes si jamais les deux molécules ont la même localisation, pour pouvoir les différencier

J'espère t'avoir aidé, mais attendons la confirmation du tut

[May']

Ah vu comme ca oui
En fait je crois savoir pourquoi je comprenais pas, c est que dans la plupart des exemples sur ce type de sujet on parle de GFp et fluorescine et vu qu elles ont le même spectre ca marche pas, donc a chaque fois on avait l exemple du prof avec la GFP plus rhodamine, et donc j ai pris ca pour ils doivent etre complémentaires (vu que ces deux la le sont ^^) mais en fait non. C était juste un exemple


Merci de ton aide!! Si le même item tombe au concours ben je te fais des cookies! Ou une tarte au citron!

[Luffylink]

Salut

Attention tu fais pas mal de confusions . En résumé :

Lorsque que l'on est présence d'un FRET, tu dois vérifier que le spectre d'émission de la première molécule, couvre le spectre d'absorbtion de l'autre molécule, pour que quand la première chope un photon et le restitue (avec une longueur d'onde légèrement supérieure) l'autre molécule le capte et renvoie le photon avec son émission propre

Dans l'immunofluorecensce indirecte (avec 4 espèces différentes), tu ne fais plus attention aux spectres :
Tu dois juste vérifier que les 2 fluochromes envoient 2 couleurs différentes, pour pouvoir les localiser les 2 en meme temps dans la cellule
(La GFP et la Fluoresceine émettent toutes 2 dans le vert : on ne verrait pas la différence entre les 2 molécules). La rhodamine émet dans le rouge, et l'YFP dans le jaune, donc on peut les utiliser avec la GFP

Voilou c'est plus clair ? ++

[May']

Merci c'est clair comme de l'eau de source!!

Je savais que y avait un truc que j'avais pas pigé! Là tout est ok, je passe en résolu

[toi aussi t'auras le droit à des gâteaux! ]

[Luffylink]

Des gâteaux ?