Cartes de restrictions

[Emilie2]

Salut!
J'avoue que cette partie du cours est plutôt compliquée pour moi,
Je ne comprends pas comment on trouve, dans les QCM(le 6), les bonnes valeurs :/
Merci de votre aide,
Bonne fin de journée!

[Lady Vic]

Coucou

Bon alors je vais faire de mon mieux pour t'expliquer mais par écrit ....

Enoncé :

Après digestion enzymatique avec l’enzyme Nae I, quels sont les fragments obtenus après migration électrophorique sur gel d’agarose ? Donner la ou les réponse(s) exacte(s) :
A) Plasmide sans insert : 2600pb + 5400pb
B) Plasmide sans insert : 6200pb + 5400pb
C) Plasmide avec insert : 6600pb + 5400pb
D) Plasmide avec insert : 3000pb + 5400pb
E) Aucune de ces réponses n’est correcte

Donc dans l'énoncé déjà tu vas repérer l'enzyme concernée pour pouvoir répondre aux items. En l'occurrence ici il s'agit de l'enzyme NaeI. Donc sur ta carte de restriction tu vas chercher les sites de coupures de cette enzyme et pas d'une autre.
1er site de coupure : 4400
2ème site de coupure : 1800

Ensuite sur ta carte de restriction 2 autres données sont essentielles :
- Celle de la taille de ton plasmide : 8000pb
- Celle de la taille de ton insert : 400pb

On peut maintenant commencer nos calculs :

Si on considère que notre plasmide n'a pas intégré l'insert :

- Notre premier fragment sera celui qui se situe entre les 2 sites de coupures de l'enzyme NaeI soit : 4400 - 1800 = 2600pb
- Notre second fragment sera ce qui reste du plasmide soit : 8000 - 2600 = 5400pb

Si on considère que notre plasmide a intégré l'insert :

- Notre premier fragment sera celui qui se situe entre les 2 sites de coupures de l'enzyme NaeI auquel on ajoute la taille de l'insert soit : (4400-1800) + 400 = 3000pb
- Le second fragment sera de 5400pb comme toute à l'heure ( le fait que l'insert soit intégré ou non ne change rien )

Voili, voilou

J'espère que c'est un peu plus clair

Bon dimanche !!

[Emilie2]

Merci pour ta réponse,
Elle est géniale!!
Juste une dernière petite question, lorsque que l'on soustrait la seconde coupure de l'enzyme à la première, c'est la méthode générale( dans le sens où il faudra tjrs faire ça?) (4400-1800=2600)
Encore merci!!
Bonne journée!

[Lady Vic]

Hey

Alors oui c'est la méthode générale ( après bien entendu les données ne seront pas les mêmes dans les différents exos et tu peux avoir des particularités où il faut prendre 2 enzymes en considération ).
Je te poste le DM de Chob de l'année dernière sur les cartes de restriction pour t'entraîner (tu verras il est pas long et bien fait ^^):

DM de Chob de l'année dernière

DM carte de restriction.pdf

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Correction

DM carte de restriction c.pdf

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Voili, voilou

[Emilie2]

D acc, merci beaucoup!
Bonne journee!