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par **flofi** » 20 Mar 2014, 17:16

Bonjour,
Lors de la deuxième phase " insertion de l'adn recombinant dans une cellule hote" les bactérie vont intégrer les plasmides au hasard. Donc soit ils vont intégrer un plasmide avec un insert correspondant à l'allèle maternel (rouge) soit l'allele paternel( bleu) , ou encore ils peuvent ne rien intégrer ou un vecteur sans insert.
Ensuite les bactérie vont former un clone avec une descendance identique mais comment différencier l'allèle maternel du paternel?
et comment à la base lors de la première phase on sait de quel parent vient l'allele contenu dans l'insert ?

par **Kardajian** » 21 Mar 2014, 11:51

Salut Flofi !

En fait, tu vas introduire ton vecteur dans la bactérie, tu vas avoir plusieurs possibilités :

- La bactérie n'intègre pas de vecteur
- La bactérie intègre un vecteur contenant l'allèle paternel
- La bactérie intègre un vecteur contenant l'allèle maternel

Sur ce vecteur, il y a un gène de resistance à un antibiotique (en général, l'ampicilline). Du coup on va pouvoir étaler nos bactéries sur une boite de pétri contenant de l'ampicilline, et ne survivront (dans la théorie) que les bactéries ayant intégrés le vecteur

Pour le moment on sait quelles bactéries ont intégré un vecteur, mais on ne sait pas quelle vecteur ils ont intégré, si c'est celui avec l'allèle maternel ou paternel

Les bactéries qui ont intégré l'ADN recombinant vont donc pouvoir former des colonies. Chaque colonies vont être isolée, on ne retrouvera donc qu'un seul type d'allèle par colonie
A ce niveau, on sait que chaque colonie ne contient qu'un seul allèle, mais on ne sait toujours pas lequel !

Après amplification clonale, on récupère notre ADN recombinant puis on fait un séquençage. Ensuite tu compares compare chacun des allèles pour retrouver la mutation et savoir si c'est celui du père ou de la mère ^^

Tu vois le truc ?