Séquensage QCM 2 Item D Annatut 2013-2014

[Andot]

Bonsoir !
Alors voilà le QCM
QCM 2 : La méthode de Sanger est la méthode de référence pour le séquençage du génôme. Donner la ou les réponse(s) vraie(s) :
D) On sépare les brins obtenus par taille par migration électrophorétique sur gel
V, mais n'utilise t'on pas plutôt une migration électrophorétique par capillaires ? Il me semble que sur gel c'était avant quand on avait les super grande planche mais que maintenant c'est par capillaires.
Est ce qu'on doit le considérer juste car on peut le faire même si on le fait plus ?

Merci d'avance

[tit' calcium]

Hello

J'avais mis Vrai parce que d'après la ronéo j'avais l'impression que la Méthode Sanger était celle historique avec 4 tubes et les ddNTP radiomarqués ... Si c'est ça cette item est vrai
Mais le QCM 3 item B C D (comptés vrai) semble dire que la méthode Sanger est bien celle avec les fluorochromes
Du coup ton item je le mettrais faux comme toi ....

Voilà dsl je ne voulais pas surcharger le forum avec un post en plus ... Alors je m'incruste

Bisous

[Andot]

C'est encore moi! Alors en faite on utilise bien la méthode de migration électrophorétique sur gel pour la méthode Sanger qui est la méthode historique, et de nos jours sur la méthode actuellement utiliser on utilise bien les capillaires c'est moi qui me suis embrouiller !
Désolé
Je laisse non résolu pour tit' calcium

[tit' calcium]

Merci

Du coup il y aurait bien un problème au QCM 3 dans les annatuts

[Kardajian]

Salut !

De quel Qcm parles tu exactement ?

[tit' calcium]

Désolée, en effet c'était pas très clair...

Donc dans la partie séquençage des annatut' :

QCM 3 : On utilise la Méthode de Sanger afin d’obtenir le séquençage d’une région d’ADN à étudier. On a obtenu tous les fragments d’ADN. Donner la ou les réponse(s) vraie(s) :
A) Une migration électrophorétique permet de séparer les fragments obtenus en fonction de leur taille
B) On obtient la séquence du brin complémentaire par détection de la couleur des fluorochromes des ddNTP des fragments obtenus par ordre de taille croissante
C) A chaque ddNTP correspond une couleur de fluorescence, cette dernière permettant de les identifier
D) Les couleurs de fluorescence sont détectées par un séquenceur automatique
E) Aucune de ces réponses n’est correcte

La réponse donnée est ABCD.
Mais j'avais cru comprendre que la méthode Sanger est la méthode dite "historique" avec des ddNTP radiomarqué et non des ddNTP avec fluorochrome (qui est sur le principe de la méthode sanger).
Du coup j'aurais mis : A.

Donc en faite je me demande surtout si la méthode Sanger c'est l'ancienne ou l'actuelle ?

Merci d'avance
Bisous bisous

[Andot]

Alors de ce que j'ai pu comprendre en revoyant le cours je te dirai ceci:

Méthode Sanger:
- Utilisation de ddNTP radiomarqué
- 4 réactions indépendantes séparés pour ne permettre l'incorporation que d'un seul type de ddNTP par tube, donc 4 tubes différents
- Ajout sur un gel pour migration élécrophorétique de chacun des tubes pour avoir une lecture de la séquence en commencent par le bas du gel afin de commencer par le plus petit fragment

Méthode actuelle: inspiré du principe de la méthode Sanger:
- Utilisation de ddNTP couplé a un fluorochrome
- 4 réactions dans un même tube donc mélange de 4 types de ddNTP dans un même tube
- Migration éléctrophorétique du contenue du tube

Séquenceur automatique:
Même principe que la méthode actuelle sauf que l'on fait passer les brins d'ADN dans un système de migration par capillaire avec une lecture laser à la fin.

Qu'en pensez vous ?

[tit' calcium]

Hey

C'est bien ce qui me semblait aussi

Merci pour ce résumé

Bisous

[Kardajian]

Je confirme !

Merci Andot !

[tit' calcium]

Ok
Merci beaucoup vous deux

Bisous