Séquencage haut débit

[lylyh]

Salut, je pense vraiment avoir rien compris au séquencage haut débit, ce serait possible une petit explication s'il vous plait..

Merci d'avance

[Kardajian]

Salut !

Le séquençage haut débit se fait en plusieurs étapes :

1 - On va commencer par fragmenter l'ADN : c'est plus simple de séquencer pleins de petits fragments qu'une seule grosse molécule d'ADN

2 - On ajoute un adaptateur à une extrémité sur chaque fragment (pour utiliser toujours le même primer) et on ajoute à l'autre extrémité de chaque fragment un code barre (pour identifier le fragment)

3 - On réalise une PCR dans une émulsion d'huile radioactive ce qui permettra d'isoler chaque fragment d'ADN dans une sphère d'émulsification (et dans chaque goutte aura lieu une réaction PCR^^)

4 - On place ces sphères dans des puits

5 - On envoie un type de nucléotide (A,C,T ou G) et on regarde si le nucléotide est intégré

Pour savoir si le nucléotide est intégré, on utilise des propriétés de conductance : on va surveiller la teneur en proton H+ du milieu
- Lorsqu'il y a formation d'une liaison phosphodiester, un proton est libéré : le pH du milieu diminue ^^

Ainsi on va pouvoir savoir quand est-ce que le nucléotide que l'on a envoyé est intégré en fonction de la variation de pH, et pour savoir quel nucléotide est intégré, et bien on les envoie un par un et on voit pour lequel il y a une variation de pH à chaque fois ^^

Est-ce que c'est bon pour toi ?

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[lylyh]

D'accord je vois beaucoup mieux le truc maintenant
Merci beaucoup