Ronéo 2 syndrome de wolfram

[Juliem]

Bonjour !


1- Page 5, je ne comprends pas comment fait-on pour savoir que la mutation est entre l'exon 6 et l'exon 7 ? L'ARNm est plus long mais comment savoir que c'est à cet endroit là qu'il y a un bout en plus ?
2- Et aussi pourquoi il est dit que l'enfant ne serait pas malade si le père avait aussi une mutation d'épissage comme la mère ? La protéine aurait été dysfonctionnelle aussi non ?

Merci !

[Mister Orrange]

Pour la première question, je me pose la même question.

Pour la deuxième, je suis d'accord avec toi mais je ne trouve pas où c'est.

[Juliem]

Pour la deuxième c'est page 5, sous le schéma dans les remarques

[Juliem]

[MarionL.]

Coucou!
Meme question que toi pour les exons 6/7, peut etre que c'est en comparant initialement les adn des parents?
Pour ta premiere question je pense que le roneiste voulait dire que si l'adn paternel n'avait pas ete mutė du tout l'enfant n'aurait pas ete malade; mais s'il y avait eu une mutation d'epissage pour le pere l'enfant aurait ete malade puisque c'est recessif!
Bonne soiree

[Serial Bieber]

Je me suis posé la même question aussi.

Peut-être qu'on effectue ici aussi plusieurs PCR (comme pour les exons), en prenant à chaque fois les jonctions entre 2 exons.
Pour chaque résultat, on compare par électrophorèse entre le produit PCR Wt et celui de la mère.
➔ logiquement on devrait avoir à chaque fois les mêmes sauf pour la région entre l'exon 6 et l'exon 7.

Après, la prof ne parle pas de ça donc ça reste une hypothèse

[Tess976]

+ 1
Peut être qu'ils font la mains pour tous mais qu'on nous parle que de la manipulation "jackpot"

[-alex-]

+ 1
Pour ta deuxième question, l'ADN du père est bien muté mais c'est une substitution d'un nucléotide et pas une mutation d'épissage. Mais l'enfant aurait été malade aussi si le père avait également eu une mutation d'épissage. Je pense que le ronéiste a juste voulu expliquer le schéma où il y a marqué pour le père "ADNc non muté".

[Juliem]

Pour ma première question, Serial Bieber, je me suis imaginé ça aussi mais ça aurait été sympa de le dire explicitement si c'est ça .. !
Et pour la deuxième question, je suis de votre avis, mais ça m'a un peu embrouillée sur le moment

Merci en tous cas à tous En attente d'une confirmation/infirmation tutoresque !

[Juliem]

Up

[Juliem]

Up

Et d'ailleurs, page 3 de la ronéo 2, on dit qu'il faut donc amplifier aussi les jonctions exon-intron. Après on donne les résultats des séquençages et page 4 ils disent que si on a pas trouvé de mutation pour la mère c'est que c'est dans l'intron, mais vu qu'on est censé avoir amplifié les jonctions exon-intron, on aurait du le voir par séquençage qu'il y a des " bout " codants en plus ?

Sauf si quand on se met a parler des " certains cas où on ne détecte aucune mutation chez les individus atteints ou alors une seule " , on ne fait plus la PCR/séquençage des jonctions exon-intron mais je vois pas pourquoi on le ferait pas vu que c'est plutôt pratique : s'il y a des bouts en plus, on sait qu'il y a un site cryptique d'épissage !

[Megan]

+1 pour ta première question je me la pose aussi ..

[niiine]

Up (et alleeeer on s'y met tous )

[Kardajian]

Coucou tout le monde

Déjà, désolée d'avoir laissé ce post en attente ... Nous allons envoyer un mail à la prof parce qu'après avoir relu le passage concernant cette notion dans la ronéo, et après discussion entre co-tut', on a toujours pas trouvé une justification qui tienne la route

On vous tient au courant le plus vite possible

[Juliem]

Merci !

[Lady Vic]

Et coucou

Comme promis, j'ai envoyé un mail à la prof et voilà sa réponse :

"Pour l'exemple que je vous ai donné sur le syndrome de Wolfram, on
suspecte la présence d'une mutation en dehors des régions exoniques et
des jonctions exon/intron du gène WFS1 car:

- on est dans une pathologie autosomique récessive (= 2 mutations
différentes hétérozygotes ou une mutation homozygote)
- dans mon exemple le séquençage a permis de mettre en évidence une
mutation hétérozygote (c.1672C>T), il manque donc la 2ème mutation qui
n'a pas été détectée par séquençage

La diapositive 47 résume ce que le séquençage a permis de détecter sur
l'allèle paternel et maternel et en prenant un exemple de variant
d'épissage pourquoi ce variant n'est pas détecté par la tech. de
séquençage des exons et des jonctions exon/intron.
A cette diapo, on ne sait pas où est le variant d'épissage, je l'ai
schématisé avec une étoile rouge pour bien comprendre pourquoi le
séquençage ne le détecte pas.

La Diapo 48 (Variants d'épissage) représente ce qui se passe au niveau
de l'ARN au moment de l'épissage pour que vous compreniez bien qu'un
variant d'épissage ne peut se détecter qu'en travaillant sur l'ARN
puisque la création du site cryptique d'épissage a une répercussion sur
l'ARN: un partie de l'intron 6 devenant exonique.

La diapo 49 reprend les 2 précédentes.
A cette étape on ne peut donc pas savoir où se trouve le variant
d'épissage chez nos patients (je l'ai schématisé pour faciliter
l'explication)
On ne sait où se trouve le variant que grâce à la PCR faite sur l'ADNc,
là encore sur la diapo 53 (Recherche des variants d'épissage) je n'ai
représenté qu'une seule PCR qui encadre la région qui nous intéresse cad
entre l'exon 6 et l'exon 7 mais il faut bien comprendre qu'en réalité il
faut réaliser une combinaison de PCR différentes entre les différents
exons pour détecter la région où se trouve le variant. L'apparition
d'une PCR à une taille inattendue permettra de cibler la région
d'interêt.

J'espère que ces explications vous permmettent de mieux comprendre,
sinon n'hésitez pas à me recontacter."

Voili, voilou

J'espère que ça répond à toutes vos questions

Bon week-end

[Megan]

Super merci beaucoup

[Juliem]

Merci beaucoup !