Le Guide pour bien débuter la LAS : Ici

Tutoriel Forum : Ici

Planning des Séances Tutorat et EB : ICI !
Errata : Séances Tutorat et EB, Annatuts, Ronéos
Centres de Téléchargement : ICI !
Réponses des Profs : ICI !
Annales : Achat, Corrections Officieuses
Annatuts : 2025-2026, Sommaire
MCC 25/26 : ICI
Candidature MMOPK : ICI
Terminale Santé : ICI

CORRECTION ST 4 : Ici

Newsletter : ICI


FISH détection directe


FISH détection directe

Messagepar MarionL. » 24 Sep 2014, 19:16

Bonsoir :D
ronéo 2 page 17 on nous parle de la détection directe de la sonde en FISH mais je n'ai pas compris en quoi ça consistait, en gros en indirect on utilise des anticorps et en direct on utilise quoi? Rien? La fluorescence même de la sonde suffit?
Merci et bonne soirée ! :)
MarionL.
Carabin No Life
 
Messages: 792
Inscription: 14 Aoû 2013, 19:55

Re: FISH détection directe

Messagepar Lamellipode » 24 Sep 2014, 19:31

Hey ! :bye:

Ici la professeur parle de marquage et de détection de la sonde DIRECTE ou INDIRECTE.

En fait, l'utilisation d'Anticorps effectivement, rend le marquage et la détection indirecte (même concept que L'IMMUNOFLUORESCENCE INDIRECTE page13)

L'insertion de nucléotides déjà fluorescents dans la sonde, et qui n'utilisent pas d'anticorps avec de bras chimique, c'est l'Hybridation IN SITU avec le brin dénaturé de l'ADN (avec la complémentarité des bases) -> visualisation DIRECTE de l'ADN double brin au niveau de la sonde marquée !

J'espère que c'est bon pour toi !

Bonne continuation :bye:
Ne mangez jamais un plat de lasagne avec vos fiches à proximité...JAMAIS.
Hihihi je suis un gâteau de riz ! :victory:

:angel:
:gigi:

Tutrice Biocell' 2014-2015

Image
Avatar de l’utilisateur
Lamellipode
Carabin Geek
 
Messages: 500
Inscription: 18 Juil 2013, 08:35

Re: FISH détection directe

Messagepar MarionL. » 24 Sep 2014, 19:40

Rapide!! :)
Mais justement ce que je comprends pas c'est comment on va voir la fluorescence de la sonde directement marquée et directement détectée, en fait au début je croyais que c'était en s'hybridant qu'elle devenait fluorescente mais j'ai lu un post de l'an dernier qui disait que non et que ça c'était pour la fluorescence induite (le fait qu'une molécule devienne fluorescente après fixation sur les acides nucléiques)! Petit bug sur le coup... :dont-know:
MarionL.
Carabin No Life
 
Messages: 792
Inscription: 14 Aoû 2013, 19:55

Re: FISH détection directe

Messagepar levure » 24 Sep 2014, 19:48

Salut! :)

Dans la détection directe, on va créer une sonde avec des fluorochromes directement greffés aux nucléotides. Quand on mettra cette sonde en présence de notre ADN elle va aller s'hybrider avec sa séquence complémentaire et on observera la fluorescence (on a rien d'autre à faire pour observer la fluorescence).

Dans la détection indirecte, on va créer une sonde où on va greffer des protéines particulières qui vont pouvoir être reconnues par des anticorps fluorescents. Si on met uniquement notre sonde, on observa pas de fluorescence. Il faut rajouter des anticorps fluorescents dirigés contre la protéine qu'on a greffée à notre sonde pour réveler la position de la sonde. (Attention un anticorps ne pourra reconnaître qu'une séquence protéique et ne pourra pas reconnaître directement une séquence nucléotidique)

Donc avec la technique de détection directe on voit directement la fluorescence alors qu'avec la technique de détection indirecte on aura une étape en plus: on passera par l'utilisation d'anticorps fluorescents (ce n'est pas la sonde qui est elle même fluorescente)

EDIT: j'ai été trop lent :(
CHEF TUT' 2015-2016

Tuteur biocell' retraité :cry: :gigi:

:gigi: TeamGigi :gigi:

Image
Avatar de l’utilisateur
levure
Ex-Chef TuT'
 
Messages: 807
Inscription: 02 Déc 2013, 20:55

Re: FISH détection directe

Messagepar MarionL. » 24 Sep 2014, 19:53

Ahaha merci beaucoup, l'explication est nickel!
Bonne soirée :cute:
MarionL.
Carabin No Life
 
Messages: 792
Inscription: 14 Aoû 2013, 19:55

Re: FISH détection directe

Messagepar Lamellipode » 24 Sep 2014, 20:01

Tu es parfait mon co-tut Levure d'amour :angel: <3
#tropd'amourenbiocell
Ne mangez jamais un plat de lasagne avec vos fiches à proximité...JAMAIS.
Hihihi je suis un gâteau de riz ! :victory:

:angel:
:gigi:

Tutrice Biocell' 2014-2015

Image
Avatar de l’utilisateur
Lamellipode
Carabin Geek
 
Messages: 500
Inscription: 18 Juil 2013, 08:35


Retourner vers Cours



Qui est en ligne

Utilisateurs parcourant ce forum: Aucun utilisateur enregistré et 1 invité