Marquage Iodure de Propidium

[Chudley]

Bonsoir
J'ai une petite question à propos des cellules apoptotiques, quand on réalise une cytométrie de flux et qu'on les marque à l'iodure de propidium, on doit tout d'abord les rendre perméables non?
Merci d'avance

[Canigou]

Coucou,

Oui tu as raison pour pouvoir utiliser l'iodure de propidium au sein d'une cellule il faut d'abord perméabilisée sa membrane. Mais ici on veut juste reconnaître une cellule apoptotiques d'une cellule nécrotique On ne perméabilise donc pas la membrane. Du coup les cellules apoptotiques n'auront aucune réaction avec l'iodure vu que l'ADN est compris dans la cellule. Par contre le test a l'iodure sera positif pour les cellules nécrotiques pour la simple et bonne raison que la cellule a explosée et donc ces composants sont dans le milieu et de ce fait l'iodure peut interagir avec l'ADN

En tout cas c'est ce que j'ai compris de l'expérience, en espérant ne pas avoir dit de bêtises et peut-être t'avoir aidée

[levure]

Salut!

Merci Canigou c'est bien ça
Quand on perméabilise les membranes c'est là qu'on va voir apparaître le pic sub G1 qui correspond aux corps apoptotiques perméabilisés et marqués à l'iodure de propidium (ils contiennent peu d'ADN car l'ADN a été réparti dans plusieurs corps apoptotiques).
En perméabilisant les membranes, on peut donc quand même savoir si il y a des cellules apoptotiques et on peut les quantifier

apoptose.png (36.2 Kio) Vu 323 fois

[TORRM]

Bonjour à tous!!

Question peut être bête , mais dans la technique du subG1 on cherche à reconnaitre les cellules apoptotiques alors pourquoi utilisé de l'iodure de propidium et s'embêter à perméabiliser la membrane ???
Alors que je pense on pourrait avoir le même résulat avec de l'Hoescht???
Puisque dans les 2 cas on marquera toutes les cellules de notre préparation ...

Et juste pour être sur ... une cellule nécrotique conservera sa quantité d'ADN, car non fragmenté, jusqu'à sa phagocytose donc impossible à reconnaitre avec cette technique .

[Lamellipode]

Hey !

J'ai répondu à une question similaire ! Utilisez bien la fonction recherche !

Ici on utilise le iodure de propinium parce qu'on en a envie haha, en fait comme notre cellule est déjà lysée tout ça tout ça pour procéder à la cytométrie de flux, on utilise ça pour marquer tout l'ADN et pas seulement les bases A-T.

Bonne continuation

[TORRM]

Oupsss désolé !!!

Merci !!!

[Chudley]

Merci

[MissBalenciaga]

Pourtant dans l'expérience d'après le prof dit que les cellules apoptotique ne sont pas sensible à l'iodure .. Il y a lyse de la MB lors de l'apoptose donc il devrait y avoir de l'iodure qui rentre comme dans la technique de sub g1 non ?

N'est ce pas le fait d'avoir fixer la cellule qui a perméabilise la membrane ? RN utilisant la fonction recherche je suis tombée sur des reponses d'ancien tut qui disent que ça semble être cela sinon jamais l'iodure ne passerait .. merci d'avance