Fluorescence induite, différencier mort cellulaire ou non !

[LAMsa]

Bonjour !!

S'il vous plait il y a un détail (très très important !) que je ne comprends pas ! Je ne comprends pas comment est-que l'Hoescht nous permet de différencier entre cellule entrain de mourir (que ce soit par nécrose ou apoptose) et cellules normales !

Dans la ronéo 14, à la page 5, on voit que les cellules normales sont en bas tandis que celles entrain de mourir sont au dessus ! Pourtant, elles ont bien la même quantité d'ADN non ?

De plus, j'aurai plutôt tendance à penser que comme la chromatine est plus condensée lors de l'apoptose, l'Hoescht aurait plus de mal à se fixer et donc on aurait une quantité moindre d'ADN fluorescent ; ce qui s'avère être faux selon le cours.

Je prie pour qu'une âme charitable vienne m'éclairer, jeune P1, perdue dans les obscurités de la Biocell !!

[Beezi]

Salut

Avec l'Hoescht tu ne peux pas différencier les cellules apoptotiques et les cellules nécrosées.

L'hoescht va colorer les cellules apoptotiques (en traversant leur membrane) ET nécrotiques (car elles ont explosé).

Pour les différencier tu devras utiliser l'annexine V et l'iodure de propidium

[LAMsa]

Oui, ça je l'avais compris !

Ce que je ne comprends pas c'est pourquoi est-ce que l'Hoescht ne colorerait pas aussi les cellules vivantes normales vu qu'il passe par la membrane ??

Merci pour ton attention !! (Magnifique photo de profil, en passant !)

[Beezi]

Oui Hoescht peut colorer également les cellules vivantes. D'ailleurs on peut l'utiliser au même titre que DAPI en fluorescence induite puisque ces deux colorants se fixent spécifiquement sur les bases A-T

Edit: Merci pour la photo

[LAMsa]

Du coup, comment différencier entre les cellules normales et celles sénescentes colorées à l'Hoescht ?
Sur le graphique de la ronéo, on voit qu'il y a bien un bloc de cellules apoptotiques et un bloc de cellules normales ! (et un bloc de cellules nécrosées, mais elles ne font pas l'objet de cette question !)

Désolée pour le tas de questions ! (et derien )

[Beezi]

Sur le graphique tu vois des cellules vivantes, apoptotiques et nécrosées.

Les cellules apoptotiques sont positives à l’Hoescht et négatives à l’Iodure de propidium

Les cellules nécrotiques positives aux deux colorants.

Je ne vois pas où tu vois les cellules sénescentes sur le graph, si tu pouvais me donner la page

[LAMsa]

Oups désolée j'avais beugué, j'ai édité mon message, c'était cellules apoptotiques et non senescentes ! Sinon c'est dans la ronéo 14, à la page 5

[Beezi]

Si on te donne que Hoescht et Iodure de propidium tu ne peux pas différencier les cellules vivantes des cellules vivantes.

Si on suit son tableau on peut suggérer que les cellules apoptotiques seront plus positives à Hoescht que les vivantes mais il n'en parle jamais dans son cours, donc il te demandera pas de faire la différence entre les deux

[LAMsa]

Ah, d'accord, merci beaucoup !!! C'est gentil d'avoir pris le temps de répondre à toutes mes questions, merci !

[Lulla]

Salut ! Je réouvre ce vieux post en espérant qu'il sera vu, à la page 5 de la ronéo 14, moi j'ai carrément un souci pour repérer dans quelle case on représente les cellules apoptotiques et nécrotiques (l'Hoescht est en horizontal et l'IP en vertical ??) et vous parlez de cellules vivantes, ou sont-elles ?
Merci !