Expérience ronéo11 p7

[Parendar]

Bonjour,je n'ai pas compris comment on pouvait avoir une décondensation sans transcriptions dans cette expérience ou pour être plus précis par quel mécanisme Lacl-GFP-VP16 va y parvenir,et par rapport à VP16,on sait qu'il va induire la transcription, donc il contrecarre l'effet de Lacl n'est ce pas?(pour être sûr d'avoir compris)
Je vous remercie par avance

[Polo]

+1 ça m'intéresse aussi !

[levure]

Salut! Désolé pour le temps de réponse on avait raté ton post

Voilà comment ça se passe:
On introduit dans une cellule un segment d'ADN contenant 256 sites de fixation pour le LacI.
LacI est une protéine qui peut se fixer à l'ADN directement au niveau de ces séquences.
(A la base, ces cellules n'expriment pas LacI)

On va faire également exprimer dans la cellule LacI.
Dans un cas, on fera exprimer LacI-GFP (la GFP sert à pouvoir visualiser LacI)
Dans l'autre cas, on fera exprimer LacI-GFP-VP16 (VP16 est le domaine d'activation d'un facteur de transcription du virus de l'herpes)

En gros on a créé un facteur de transcription: LacI est le domaine de fixation à l'ADN, VP16 est le domaine d'activation de la transcription et la GFP permet de localiser ce facteur de transcription

Dans les cellules où on exprime GFP-LacI, on va avoir une fixation de GFP-LacI au niveau des 250 sites de fixation. On observe uniquement une grosse tâche, ce qui veut dire que tous les sites de fixation sont très proches l'ADN est très condensé

Dans les cellules où on exprime GFP-LacI-VP16, on ne voit pas une grosse tâche unique, au contraire on voit pleins de petites tâches espacées, ce qui témoigne d'une décondensation de l'ADN (les sites de fixation de LacI sont éloignés car on observe une fluorescence diffuse donc l'ADN est décondensé)

La présence du facteur de transcription a permis la décondensation de l'ADN.
Or, on sait que les facteurs de transcription permettent la transcription, on peut donc supposer que c'est la transcription et non directement le facteur de transcription qui entraîne la décondensation de l'ADN, par exemple on peut supposer que c'est le passage de l'ARN polymérase qui décondense l'ADN.


Pour vérifier on réalise la même expérience sauf que cette fois on rajoute de l'alpha-amanitine qui inhibe la transcription.
On a fixation du facteur de transcription (ici LacI-GFP-VP16) mais on n'a pas transcription

On obtient le même résultat que précédemment (décondensation de l'ADN)

les facteurs de transcription peuvent décondenser l'ADN indépendamment de la transcription

J'espère que c'était clair sinon n'hésitez pas

[Parendar]

Salut,donc si j'ai bien compris,un simple contact suffit?
(pas de problème pour les délais )

[levure]

Quand même pas un simple contact :p
Les FT vont permettre de recruter des histones acétyltransférases etc qui vont changer la structure de la chromatine indépendamment de la transcription même si le but c'est de transcrire

[Parendar]

Oui^^,d'accord,tout est bon pour moi.J'attends de voir ce qu'en pense Polo.
Merci et à bientôt

[Polo]

C'est bon pour moi, merci Levure !!!!