apoptose en gel d'agarose

[Oxo]

Bonjour j'ai pas très bien compris cette technique, enfin à quoi correspond quoi sur la photo, bref en fait fait c'est la photo qui m'embête, je sais pas où est quoi... :/ (page 5 ronéo 14)

[levure]

Salut!

On a placé des cellules dans différents puits et on les a mis en présence de caspase 3. La caspase 3 va déclencher l'apoptose de ces cellules.

Tout en haut: " + " ça veut dire qu'on introduit de la caspase 3 dans les cellules et " - " ça veut dire qu'on n'en introduit pas.
La deuxième ligne, c'est le temps qu'on attend avant de prélever les cellules des puits.
La dernière colonne correspond aux différents puits.
Les tâches sur le gel d'électrophorèse tout à gauche, c'est un étalonnage (on fait migrer des molécules de poids moléculaire connu pour se repérer par rapport à elles.

Au fur et à mesure du temps, on lyse les cellules et on récupère leur ADN pour le faire migrer sur un gel d'électrophorèse.

On voit qu'au départ on obtient toujours la même tâche sur le gel, donc l'ADN migre au même endroit.
Puis, au fur et à mesure qu'on attend, la marque de l'ADN sur le gel s'étend vers le bas. Ça témoigne de la présence de fragments d'ADN de bas poids moléculaire (plus un fragment est léger, plus il migre loin).

On a donc induit l'apoptose dans des cellules et on a observé que l'apparition de fragments d'ADN de plus en plus légers au cours du temps.

En fait c'est dû à l'activation de nucléases qui vont cliver l'ADN pendant l'apoptose, donc on a pleins de petits fragments d'ADN au lieu d'avoir nos 46 chromosomes complets

[gunzandcs]

excusez moi de taper l'incruste mais j'ai aussi du mal a comprendre levure:
- tu dis qu'au fur et a mesure que le temps passe on voit des fragments plus petits = les chromosomes sont "coupés" en petits morceaux, mais je pourquoi est ce que dans les puits 2-3-..-6 , en présence de CASPASE-3 , on ne voit pas les chromosomes coupés en petits morceaux?

j'ai du mal a comprendre l'experience , mais j'ai compris que lors de l'apoptose l'adn est fragmenté.
j'ai aussi une autre question, si lors de l'apoptose la chromatine est hyper condensé, comment est ce que les nucleases peuvent la couper en petits morceaux? je croyais que du coup on aurait surtout des gros morceaux d'adn


merci et desolé d'avance si ces questions ont deja été posés

[levure]

Pour les puits 2 à 6 c'est un grand mystère mais bon on s'en fou, l'expérience en elle même est juste là pour illustrer.
Il faut juste retenir qu'on a une fragmentation de l'ADN lors de l'apoptose

La condensation de la chromatine se fait en même temps que sa fragmentation donc on agit pas une fois que la chromatine est complètement condensée sinon c'est vrai que ça rendrait plus difficile la fragmentation (même si il reste toujours quelques sites accessibles)

[gunzandcs]

Pour les puits 2 à 6 c'est un grand mystère mais bon on s'en fou, l'expérience en elle même est juste là pour illustrer.
Il faut juste retenir qu'on a une fragmentation de l'ADN lors de l'apoptose

La condensation de la chromatine se fait en même temps que sa fragmentation donc on agit pas une fois que la chromatine est complètement condensée sinon c'est vrai que ça rendrait plus difficile la fragmentation (même si il reste toujours quelques sites accessibles)

D'accord merci pour la reponse, tout est bon!

bon week end!