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expérience tutorat 10


expérience tutorat 10

Messagepar MarionL. » 25 Nov 2014, 22:52

Bonsoir :)
Dans l'énoncé on nous dit accumulation de cholestérol dans la mb lysosomale pour les mutations mais je ne vois pas comment on aurait pu faire le lien entre u186661 et les mutations NPC... ok il y a un problème avec le lysosome sur la figure 1 mais comment savoir si c'est le même phénotype puisqu'on a pas la comparaison avec les cellules mutées ? En plus dans le reste des figures on nous dit que les cellules ne sont pas mutées donc j'ai vraiment fait comme si les résultats ne montraient rien sur NPC moi :)
Je veux bien une petite expliquation parce que j'ai l'impression d'avoir completement bugé sur ca ahah :lol:
MarionL.
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Re: expérience tutorat 10

Messagepar levure » 25 Nov 2014, 23:03

Salut! :)

Sur les images de fluorescence, on observe pas de marquage significatif de filipine dans les cellules sauvages. La filipine marque le cholestérol non estérifié donc si on a pas de marquage par la filipine c'est qu'on a pas de cholestérol non estérifié.

On voit que pour les cellules prétraitées au U18666A, on a une accumulation de filipin dans la cellule, ce qui veut dire qu'on a une accumulation de cholestérol non estérifié.
On met en évidence dans ces mêmes cellules LAMP2 qui est un marqueur de la membrane lysosomale.
Quand on superpose les 2 images (merge) on voit que la fluorescence de la filipin (marque le cholestérol non estérifié) et de LAMP2 (marque les membranes des lysosomes) colocalisent (elles se trouvent exactement au même endroit).

On peut conclure que dans les cellules marquées au U18666A, on a une accumulation de cholestérol non estérifié (marqué à la filipine) au niveau des membranes lysosomales (marquées grâce à LAMP2)

Dans le texte d'introduction on te dit: "Les cellules portant les mutations NPC ont un phénotype caractéristique avec une accumulation de cholestérol non estérifié au niveau de leurs lysosomes (au niveau de la membrane lysosomale)."

Un prétraitement au U18666A permet donc de mimer un phénotype NPC dans les cellules de culture :)

Est ce que c'est bon pour toi? :)
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Re: expérience tutorat 10

Messagepar MarionL. » 25 Nov 2014, 23:29

Ahhhhh mais oui!! "LAMP2 qui est un marqueur de la membrane lysosomale" je crois que j'ai légèrement raté cette information!!
Merci pour le tut de ce soir en tous cas et pour ta rapidité ;)
MarionL.
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