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[umoteck]

Salut!

J'ai pas mal de questions, alors je commence:

1) je ne sais jamais comment faire pour les exos avec les Ac de lapin, de cheval, de renard, d'orque, de chat, de serpent et j'en passe, comment faire?

2) Pourquoi dans la technique SKY on dit que l'on à 24 couleurs alors que l'on colore chaque K avec une couleur différente?

3) Pour l'utilisation des levures, je ne comprends le sens d'hétérologue dans cette phrase: "elles offrent un système hétérologue d'expression des gènes" (apprendre c'est bien comprendre c'est mieux)

4) dans l'analyse génétique: je n'ai pas compris l'histoire des souris mosaïques pourquoi l'hétérogène ne s'exprime que chez certaines alors qu'il a été intégré au génome? a cause de la mitose?

Merci.

[levure]

Salut!

Salut

J'ai pas mal de questions, alors je commence:

1) je ne sais jamais comment faire pour les exos avec les Ac de lapin, de cheval, de renard, d'orque, de chat, de serpent et j'en passe, comment faire?
1. Il faut que l'anticorps primaire provienne d'une espèce différente de celle de la protéine que tu veux visualiser (car un animal ne peut pas créer d'anticorps contre une protéine de sa propre espèce sauf en cas de maladie auto immune)
2. Il faut que l'anticorps secondaire appartienne à une espèce différente de celle de l'anticorps primaire (pour la même raison qu'au dessus)
3. Si tu veux localiser 2 protéines à la fois, les 2 anticorps primaires doivent provenir de 2 espèces différentes sinon les 2 anticorps primaires seront reconnus par le même anticorps secondaire
4. Si tu veux localiser 2 protéines à la fois, il faut que les 2 anticorps secondaires soient couplés à des fluorochromes qui émettent dans des longueurs d'ondes différentes sinon on ne pourra pas différencier les 2 protéines qu'on veut localiser

2) Pourquoi dans la technique SKY on dit que l'on à 24 couleurs alors que l'on colore chaque K avec une couleur différente?
On a 22 couleurs pour localiser les autosomes (22 paires) et 2 autres couleurs pour les gonosomes (X et Y ne sont pas des chromosomes homologues donc ils ont des séquences différentes et sont reconnus par des sondes différentes)

3) Pour l'utilisation des levures, je ne comprends le sens d'hétérologue dans cette phrase: "elles offrent un système hétérologue d'expression des gènes" (apprendre c'est bien comprendre c'est mieux)
Ça veut dire qu'on va pouvoir faire exprimer aux levures des gènes qu'elle n'exprime pas naturellement pour pouvoir étudier ces gènes
Par exemple tu peux transfecter un gène humain dans un micro organisme pour étudier sa fonction alors que normalement ce micro organisme n'exprime pas ce gène
C'est plus facile de travailler sur des micro organismes que sur des cellules humaines car les conditions de culture sont plus simples

4) dans l'analyse génétique: je n'ai pas compris l'histoire des souris mosaïques pourquoi l'hétérogène ne s'exprime que chez certaines alors qu'il a été intégré au génome? a cause de la mitose?
Je suis pas sûr d'avoir bien compris ta question
Tu veux savoir pourquoi les souris mosaiques n'expriment pas le trangène dans tous leurs tissus ou bien pourquoi les cellules filles après croisement n'expriment pas toutes le transgène?

Merci.

[umoteck]

"Je suis pas sûr d'avoir bien compris ta question
Tu veux savoir pourquoi les souris mosaiques n'expriment pas le trangène dans tous leurs tissus ou bien pourquoi les cellules filles après croisement n'expriment pas toutes le transgène? " les deux en fait et merci pour les précédentes réponses.

[levure]

Ok c'est parti

Pour obtenir les souris mosaïques, on injecte des cellules souches embryonnaires ayant intégré le transgène dans un blastocyste de souris. Du coup, dans ce blastocyste, toutes les cellules n'exprimeront pas le transgène : on aura d'un côté les cellules de souris "normales" qui étaient dans le blastocyste avant l'injection (elles n'expriment pas le transgène) et d'un autre côté les cellules souches embryonnaires qu'on a injectées dans le blastocyste (celles ci expriment le transgène).

Dans ce blastocyste de souris chaque cellule présente va se diviser et au fur et à mesure se différencier pour au final donner une souris

Certains tissus de la souris formée proviendront de cellules qui étaient initialement dans le blastocyste (celles là on y a pas touché) ces tissus sont composés de cellules qui n'expriment pas le transgène
D'autres tissus dériveront des cellules souches embryonnaires qu'on a injectées dans le blastocyste ces tissus sont composés de cellules qui expriment le transgène
(le transgène s'est intégré sur un seul chromosome donc les souris sont hétérozygotes au niveau des tissus qui expriment le transgène)

Une fois qu'on a obtenu des souris mosaïques qui expriment le transgène dans leurs gamètes, on va faire des croisements avec des souris sauvages


Les souris mosaïques pourront faire 2 types de gamètes : des gamètes contenant le chromosome avec le transgène (50%) ou des gamètes avec le chromosome qui ne contient pas le transgène (50%)
Les souris sauvages feront un seul types de gamète : les gamètes avec les chromosomes sauvages, donc sans transgène (100%)

Au final (par la magie de la méiose, cf le cours de BDR sur la méiose) : on va obtenir 50% de souris hétérozygotes pour le transgène et 50% de souris avec le chromosome sauvage.

Cette fois ci, les souris hétérozygotes avaient le transgène dès la première cellule œuf car le gamète qui est à l'origine de la fécondation portait ce transgène toutes les cellules (tous les tissus) de ces souris expriment le transgène (puisque toutes les cellules dérivent de la cellule oeuf qui elle même provient de la fusion des gamètes mâle et femelle)

Enfin, on peut coupler les souris hétérozygotes entre elles et (encore une fois par la magie de la méiose, cf le cours de BDR) on obtient 25% de cellules homozygotes (qui portent le transgène sur les 2 chromosomes homologues où a été intégré le transgène initialement)

[umoteck]

MERCI BEAUCOUP!!!!